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第一章 miR-210在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素及预后的相关性研究目的：探讨microRNA-210(miR-210)在胃癌(gastric cancer, GC)组织中的表达及其临床意义。方法：检测78例胃癌组织及相应的癌旁组织中miR-210的表达情况,分析其与临床病理因素及预后的关系。结果：实时定量PCR发现,miR-210在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,两者相比较有统计学差异(P<0.05)。MiR-210的表达与肿瘤大小(P=0.022)、淋巴结转移(P=0.018)和TNM分期(P=0.034)密切相关。MiR-210低表达患者5年生存率为48.2%,MiR-210高表达患者5年生存率为30.4%,差异具有统计学意义(χ2=4.216,P=0.040)。结论：1.与癌旁组织比较,胃癌组织中miR-210的表达明显增加,提示miR-210可能与胃癌的发生发展有关。2.MiR-210表达水平与胃癌临床分期及转移潜能有关,并可作为判断预后的可靠指标。第二部分 缺氧对胃癌细胞侵袭转移的影响及miR-210的作用研究目的：观察缺氧状态对胃癌细胞增殖、侵袭能力及EMT过程的影响,研究miR-210在这一过程中的可能作用。方法：采用LipofectamineTM 2000转染hsa-mir-210 inhibitor于胃癌细胞株中,敲低miR-210的表达,实时定量PCR检测常氧、缺氧及缺氧miR-210抑制状态下胃癌细胞miR-210的表达,MTT法、Transwell侵袭实验和western blot分别检测细胞增殖、侵袭能力及EMT相关蛋白的变化。结果：与常氧组相比,缺氧组miR-210表达显著上调(P<0.05)；与缺氧组相比,缺氧抑制组miR-210的相对表达量显著降低(P<0.05). MTT法检测细胞的生长抑制率,transwell检测其侵袭能力,western blot检测EMT相关蛋白表达,发现与常氧组相比,缺氧组胃癌细胞相对存活率显著升高,侵袭细胞数明显增加(P<0.05)；而通过miR-210 inhibitor抑制miR-210的表达后,胃癌细胞相对存活率显著降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05).Western blot结果发现与常氧组相比,缺氧组上皮标志物表达减少,间质标志物表达增加；而降低miR-210表达可逆转EMT相关蛋白的表达。结论：1、缺氧能诱导miR-210表达增加,同时增强胃癌细胞的增殖侵袭能力,促进EMT过程。2、敲低miR-210表达抑制了缺氧状态下胃癌的增殖侵袭能力,并且抑制EMT过程。第三部分 缺氧状态下胃癌细胞miR-210作用靶点的研究目的：研究缺氧状态下胃癌细胞miR-210的作用靶点。方法：通过生物信息软件预测miR-210的可能靶点,检测常氧组、缺氧组和缺氧miR-210抑制组中miR-210可能靶基因及蛋白的表达。结果：选择PicTar、TargetScan和mirbase这3个软件预测miR-210的靶基因,结合既往相关的文献,发现HOXA9、EFNA3和FGFRL1为其可能的靶基因。实时定量PCR结果显示缺氧组HOXA9的相对表达量低于常氧组,而缺氧miR-210抑制组则高于缺氧组,差异有统计学意义(P<0.05)；缺氧miR-210抑制组FGFRL1的相对表达量则明显高于缺氧组(P<0.05)。EFNA3的表达在三组中无明显差异。Western blot的结果表明缺氧组与常氧组相比FGFRL1的蛋白表达比值下降,差异具有统计学意义(P<0.05),缺氧miR-210抑制组与缺氧组相比FGFRL1的蛋白表达比值则明显上升(P<0.05)。而HOXA9和EFNA3蛋白在三个组中表达无显著性差异。结论：1、FGFRL1的表达受缺氧的影响,同时抑制胃癌细胞中miR-210可以上调FGFRL1的表达。2、FGFRL1可能是胃癌细胞缺氧状态下miR-210的靶基因,而HOXA9和EFNA3不是miR-210在胃癌细胞中的靶基因。