论文部分内容阅读
研究目的:1、通过研究硫化锌包被硒化镉量子点(CdSe/ZnS QDs)基本物理及光学特征,验证其是否为一种适用于生物医学的荧光染料。2、通过检测CdSe/ZnS QDs及氯化镉(CdCl2)对Hela细胞活性及凋亡率的影响,探究CdSe/ZnS QDs是否具有细胞毒性作用。3、通过比较空白对照组、CdSe/ZnS QDs组及CdCl2组Hela细胞内ROS产量,探究CdSe/ZnS QDs诱导Hela细胞凋亡可能的机制。4、通过对凋亡相关蛋白的检测,进一步阐述CdSe/ZnS QDs诱导细胞凋亡的机制。方法:本实验采用透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)、紫外分光光度计(Ultraviolet spectrophotometer)及荧光光谱仪(Fluorescencespectrometer)对CdSe/ZnS QDs进行表征。透射电子显微镜用于了解CdSe/ZnSQDs的大小、形状、外观均一程度,紫外分光光度计用于检测CdSe/ZnS QDs的吸收光波长范围,荧光光度计用于检测CdSe/ZnS QDs所发射荧光波长范围。在建立稳定Hela传代细胞株,通过MTT实验比较不同浓度CdSe/ZnS QDs及CdCl2孵育Hela细胞24h后细胞活性的改变,再通过流式细胞术比较不同浓度CdSe/ZnS QDs及CdCl2对Hela细胞凋亡率的影响。通过对比空白对照组、CdSe/ZnS QDs组及CdCl2组Hela细胞活性及凋亡率差异,初步判断CdSeCdSe/ZnS QDs是否具有细胞毒性。通过DCFH-DA荧光探针检测不同浓度CdSe/ZnS QDs及CdCl2孵育Hela细胞24h后细胞内ROS量,并比较不同组之间ROS量的差异,探究CdSe/ZnSQDs对Hela细胞内ROS量的影响。最后通过Western blot检测不同浓度CdSe/ZnS QDs及CdCl2孵育Hela细胞24h后细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达量,对比不同组间Bcl-2与Bax蛋白表达量差异分析CdSe/ZnS QDs对细胞内Bcl-2与Bax蛋白表达的影响并分析其可能的原因。结果:1、本实验所用CdSe/ZnS QDs颗粒均匀呈球形,直径小,具有良好的单分散性和晶体结构,激发光谱宽,发射光谱连续且对称。2、CdSe/ZnS QDs对Hela细胞的毒性作用远强于CdCl2,且其细胞毒性作用与给药浓度呈正比。3、 CdSe/ZnS QDs较CdCl2诱导Hela内产生更多的ROS,且CdSeQDs/ZnS对ROS的诱导效应与给药浓度成正比。4、CdSe/ZnS QDs较CdCl2诱导Hela细胞凋亡效应更强,且其诱导凋亡效应与给药浓度成正比。5、CdSe/ZnS QDs处理组细胞内Bcl-2蛋白表达量较空白对照组及相应CdCl2处理组少,而Bax蛋白表达较空白对照组及相应CdCl2处理组多。结论:1、CdSe/ZnS QDs直径小,光学特性优,适用于生物医学研究。2、CdSe/ZnS QDs具有细胞毒性作用,其毒性作用强于CdCl2,且毒性作用与给药浓度成正比。3、CdSe/ZnS QDs能通过促进细胞内ROS生成而诱导Hela细胞凋亡,且CdSe/ZnS QDs能通过诱导Bax表达增加、Bcl-2表达减少而诱导Hela细胞凋亡。