【摘 要】
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自1988年全球实施根除小儿麻痹症计划以来,经过世界各国的努力取得了瞩目的进展,野生毒株引发的小儿麻痹症病例下降了99.9%。在三个型的野生脊髓灰质炎病毒(wildpoliovirus,WPV)中,Ⅱ型(WPV2)最后一例病例发生在1999年,以后再也没有发生WPV2感染所致的麻痹,并于2015年被全球消灭脊髓灰质炎认证委员会(theGlobalCommission
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自1988年全球实施根除小儿麻痹症计划以来,经过世界各国的努力取得了瞩目的进展,野生毒株引发的小儿麻痹症病例下降了99.9%。在三个型的野生脊髓灰质炎病毒(wildpoliovirus,WPV)中,Ⅱ型(WPV2)最后一例病例发生在1999年,以后再也没有发生WPV2感染所致的麻痹,并于2015年被全球消灭脊髓灰质炎认证委员会(theGlobalCommissionfortheCertificationofPoliomyelitisEradication,GCC)宣布在全球范围内消灭;Ⅲ型野毒株也于2019年宣布全球消灭。但只要减毒活疫苗(attenuatedoralpoliovaccine,OPV)使用就不可避免的会出现服苗者将Ⅱ型减毒株经肠道复制后排到环境中,引发循环疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(CirculatingVaccineDerivedPoliovirus,cVDPV)的发生。为此,在2016年全球实现了将Ⅱ型疫苗株从常规三价口服脊髓灰质炎病毒疫苗(thetrivalentoralpoliovaccine,tOPV)中撤出。但脊灰病毒属于肠道病毒,以往服苗排放到污水中的病毒可存活一定时间,环境中的病毒偶然感染人群。甚或,口服疫苗感染免疫缺陷患者中,可以长期带毒并可在复制过程中产生变异恢复野生脊髓灰质炎病毒(immunodeficiency-associatedvaccine-derivedpoliovirus,iVDPV)的神经毒力和传播特性。所以,cVDPVs和iVDPV的变异引起人们的担忧。出于生物安全考虑,将实施全球性的Ⅱ型脊髓灰炎病毒(poliovirustype2,PV2)封存,只允许在WHO认可的少数几个P3实验室中使用,将给以中和抗体评价群体免疫力带来不便。我们采用生物信息学预测OPV2的中和抗原变异,并制备假病毒和免疫动物,进行了免疫原性及其交叉中和活性研究。研制假病毒来替代活的脊髓灰质炎病毒用于中和试验,建立安全可靠的免疫力评价新方法对脊灰根除的最后阶段维持无脊灰状态具有重要意义。本文构建Ⅱ型SabinPV假病毒颗粒(简称pseudo-S-Ⅱ),通过Westren分析、感染性测定和电镜形态观察等研究,发现其免疫原性与感染性病毒颗粒相近,直径大小约30nm。使用Ⅱ型病毒和pseudo-S-Ⅱ进行中和试验测定40份血清样本中的特异性中和抗体,其平均几何效价分别为36.47、55.90,相关性好(R2=0.87),无统计学差异。进行11次独立重复试验,95%置信区间为2012.37-2828.36,CV值为0.29。美国疾控中心选用免疫缺陷病人分离的一株Ⅱ型iVDPV(iVDPV2)与OPV、SabinIPV(sIPV)和SalkIPV(wIPV)疫苗人体免疫血清进行交叉中和试验发现中和活性显著降低。本研究通过生物信息学技术等对这株iVDPV的VP1、VP2和VP3主要中和位点进行分析,发现其主要中和位点的一级氨基酸结构中有16个氨基酸位点发生改变,其中有13个氨基酸发生带电性质或极性的改变。以Poliovirustype2(strainLansing)(PDB序列号:1EAH)为模板使用同源建模SWISSMODEL预测iVDPV2、SabinⅡ的衣壳蛋白构像。使用Pymol2.1软件显示预测构像。VP1的679和680,VP2的141三个氨基酸残基的改变影响了病毒中和位点的空间构象。本研究对三个位点进行定点突变构建11株突变假病毒,分别与兔抗SabinⅡ多抗和接种过脊灰疫苗的人血清进行中和试验,发现突变都会影响血清交叉中和能力,其中抗血清对RA141679S的突变组合交叉中和效价下降最显著(p
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