小麦麸皮内源性β-木糖苷酶的分离纯化及其酶学特性研究

来源 :河南工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenmin673594913
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
β-木糖苷酶是木聚糖酶系中重要的水解酶之一,现已广泛应用于多个领域,国内对其研究多集中在微生物源,而本研究以中国小麦麸皮内源性β-木糖苷酶为研究对象,通过对其提取分离纯化,确定其酶学特性,旨在为木聚糖酶对阿拉伯木聚糖(AX)的作用机理、对面团及制成品的品质影响研究提供理论参考。首先,测定不同品种小麦麸皮内源性β-木糖苷酶的酶活力及其酶学特性。结果表明,不同品种小麦麸皮内源性β-木糖苷酶的酶活力不同,同种小麦的粗麸皮和细麸皮中的内源性β-木糖苷酶的酶活力也不同;细麸皮中β-木糖苷酶的酶活力均高于粗麸皮中β-木糖苷酶酶活力,粗麸皮中郑麦8998的β-木糖苷酶酶活力最大,细麸皮中花培8号小麦β-木糖苷酶酶活力最大;郑麦8998、花培8号、郑麦366、郑麦9023四种小麦粗麸皮内源性β-木糖苷酶的最适反应温度分别为60℃、50℃、50℃、60℃;最适反应pH值均为5;花培8号和郑麦366两种小麦粗麸皮内源性β-木糖苷酶在20~50℃范围内,酶活力稳定性较好,而郑麦8998和郑麦9023两种小麦粗麸皮内源性β-木糖苷酶在20~60℃范围内,温度对β-木糖苷酶的酶活力影响较小;四种小麦粗麸皮内源性β-木糖苷酶在pH为5~6时酶活力稳定性较好;Ca2+、Co2+促进β-木糖苷酶的酶活力,而Ag+对β-木糖苷酶的酶活力有较强的抑制作用。其次,采用响应面法优化小麦麸皮内源性β-木糖苷酶的提取条件。在几种单因素实验的基础上,选择提取液pH值为5、料液比1:9、提取时间35min作为实验的中心点,进行中心组合设计响应面试验。通过响应方程的回归分析得到小麦麸皮内源性β-木糖苷酶的最佳提取条件为:提取液pH值为4.93、料液比为1:9.85、提取时间为36.85min。通过试验验证,木糖苷酶提取量的平均值为84.19mU/g,与预测值非常接近,具有很高的拟和性。第三,对郑麦8998小麦粗麸皮中的β-木糖苷酶进行提取分离纯化。β-木糖苷酶的粗酶液经硫酸铵沉淀、热处理、CM Sepharose FF凝胶柱柱层析、Mono-S阳离子交换柱层析、Mono-Q阴离子交换柱层析几个步骤纯化后,比酶活力高达230.75mU/mg,β-木糖苷酶的回收率为2.74%,纯化倍数为480.82倍,纯化结果较好。对纯化后的β-木糖苷酶进行了SDS-PAGE电泳,得出此β-木糖苷酶的分子量在40kD左右。第四,纯化后的β-木糖苷酶的酶学特性。小麦麸皮内源性β-木糖苷酶的最适反应温度为60℃,在20~50℃范围内稳定性好,放置60min后其活力可保持在70%以上,最适反应pH值为5,在pH值5~6范围内,放置60min后其活力仍可维持在80%以上。Ca2+、Co2+离子促进β-木糖苷酶的酶活力,它们分别提高了酶活力5.83%和9.51%, Cu2+、Ni+、SDS抑制β-木糖苷酶活力,使其酶活力降低到初始酶活力的70%以下,特别是Ag+使其酶活力降低到初始酶活力的18.94%。小麦麸皮β-木糖苷酶的动力学参数Km和Vmax分别为4.518mg/mL,0.392μmol/min·g-1。最后,探讨了小麦在发芽条件下,小麦麸皮内源性β-木糖苷酶酶活力及AX含量的变化。研究发现,随着发芽时间的延长,不同品种的小麦粗麸皮和细麸皮中的总AX含量呈下降趋势,β-木糖苷酶的酶活力呈现先升高然后下降的趋势。在发芽84或96h后,β-木糖苷酶酶活力最高,而在84或96~108h,β-木糖苷酶酶活力开始下降。
其他文献
离岸贸易是一种新兴的贸易模式,近二十年以来,得到了极为快速地发展。离岸贸易主要集中于具有优惠税收政策、低廉运输成本、稳定贸易环境的区域或城市,世界上许多港口城市都通过
<正>鼻咽部纤维血管瘤是青少年鼻咽部最常见的高血运良性肿瘤,其治疗方法主要是手术切除,但术中往往并发大出血,导致手术切除不全,肿瘤残留,术后复发。目前,不少方法被提出用
会议
<正>呼吸机用于辅助或控制患者的自主呼吸运动,以达到肺内气体交换功能,降低人体消耗,利于患者呼吸功能的恢复。绍兴市人民医院ICU及EICU配备了Servo-i和Sevo-s型呼吸机(德国
[目的]在下肢骨牵引中巧垫薄软枕,以预防压疮的发生。[方法]按住院时间段将102例行下肢骨牵引病人分为对照组(50例)和观察组(52例),对照组按传统方法用绷带以螺旋式缠绕布朗架,观察
目的:观察加减黄芪大黄汤联合前列地尔治疗慢性肾功能衰竭的效果。方法:62例按随机数表法分为两组各31例。两组均用前列地尔治疗,观察组联合加减黄芪大黄汤治疗。结果:观察组
目的:研究Maspin及Ki67在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测34例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤及11例慢性鼻窦炎组织中Maspin及Ki67的表达。结
裁板锯属于人造板加工中的初加工设备,随着人造板加工工艺技术的进步,复合木门等行业对人造板的需求量剧增,促进裁板锯设备快速发展。然而,通过对国内外裁板锯产品的对比不难
结合两位公开课教师对一堂阅读课的不同处理方式,反思如何运用英语学科素养理论设计教学过程,从制订教学目标、课堂导入、课文处理方式、重难点处理以及细节处理等方面探究对
磁流体是由固相直径约10纳米的磁性微粒在悬浮在非磁性载体液中,形成的稳定悬浮液。磁流体首先是流体,因而它的运动遵循流体力学的规律;其次它是磁性物质,它的行为可以受到磁
采用氧化还原体系结合氯化镧/氯化铈混合稀土对羊毛进行活性染料低温染色,确定其适宜的染色配方及工艺。首先选用双氧水/硫脲、双氧水/乙二醛和过硫酸钾/硫脲这三种氧化还原体