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目前癌症已经跃为威胁人类健康的第一杀手,治疗或消灭肿瘤成为世界医学界的难题,治疗神经系统肿瘤和疾病,诸如中脑神经母细胞瘤、帕金森氏病等成为当前最为迫切解决的热门课题之一。神经系统肿瘤疾病的治疗对于提高人类生活质量、延长人类寿命至关重要。人们应用手术、化疗、中药治疗、基因治疗、自身免疫治疗等手段虽然有一定治疗效果,但是伴随的毒副作用和昂贵的治疗费使患者倍受痛苦,甚至放弃治疗。有效地无毒副作用治疗肿瘤疾病是研究者多年的追求和愿望。因而,探索生物学因素中药康莱特(KLT)对中脑神经组织的影响,探索KLT、溶瘤病毒新城疫病毒(NDV)和豆类丝核菌代谢产物苦马豆素(SW)联合抗肿瘤疾病的作用机制是本研究的选题目的。本研究通过建立的S37动物肿瘤模型,运用H.E染色、TH染色、NeuN染色、GFAP染色技术和免疫组化SP法研究了三种药物抗肿瘤的效果及其作用机制。本研究取得以下结果:1.成功地对中脑神经组织进行了体外培养。试验表明,用1-4d胚鼠中脑组织培养运用基础培养基;5-10d,置换为N4培养基,初级突起和次级突起得到了充分的发育,并由突起形成了网络状结构。2.将KLT作用于中脑组织培养,表明添加不同浓度KLT作用后,浓度为0.001mg/ml的KLT对多巴胺能神经元具有促进生长的作用,神经元数量增加了13.3%,浓度为0.01mg/ml、0.1mg/ml、1.0mg/ml的KLT作用后,神经元的数量有所下降,表明高浓度KLT对中脑组织有轻微毒害作用,低浓度KLT能够很好地刺激中脑组织神经元的生长。3.用KLT作用于帕金森症模型中,用不同浓度KLT作用于受损的多巴胺能神经元,结果表明,各浓度KLT稀释液均能显著提升多巴胺能神经元神经元的数量,浓度为0.001mg/ml的KLT比对照度提高了88%。且细胞突起明显变长,次级突起数量增多,胞体圆滑。4.N18TG2神经母细胞瘤在N4培养基中呈现旺盛生长,胞体变大,伸出几个大的初级突起,初级突起上伸出很多细丝状的次级突起。MTT结果表明在12h,24h和48h,在N4培养基中N18TG2生长速度显著高于NBT培养基中的生长速度,在48h时,N4培养基中的细胞数是NBT培养基中的3倍。5.实现了胚鼠中脑组织与鼠源神经母细胞瘤N18TG2的共培养。将接种浓度为2.5×104、5.0×104和105 cells/ml的N18TG2神经母细胞瘤细胞接种于中脑神经组织。结果显示,各接种浓度均能在中脑组织中生长,但生长比较缓慢。N18TG2低接种浓度共培养中,神经母细胞瘤对中脑组织细胞几乎无伤害作用,只有高浓度接种的肿瘤细胞才对神经元形成毒害作用,神经元出现胞突变短,胞体肿胀,次级突起消失;神经元数量减少等变化。6.不同浓度KLT作用于N4培养基和NBT培养基的神经母细胞瘤N18TG2, MTT结果显示,各浓度KLT均对N18TG2神经母细胞瘤的有极显著的抗肿瘤效果。高浓度KLT组中可见到大量的肿瘤细胞碎片,在各种浓度KLT上清液中均能见到大量凋亡小泡,表明KLT对N18TG2神经母细胞瘤的抗肿瘤作用呈现剂量依赖关系,高浓度KLT导致肿瘤细胞发生坏死,低浓度KLT诱导肿瘤细胞凋亡。7.不同浓度KLT作用于神经母细胞瘤N18TG2细胞与中脑组织共培养中,结果显示,浓度为0.001mg/ml的KLT的肿瘤细胞数在各个时期均显著低于对照组,肿瘤抑制率为36%,且该组神经元的初级突起和次级突起均是完整的,神经元突起构成的网络结构依然清晰。在其他浓度KLT作用下,肿瘤细胞有所减少,但差异不显著。同时在共培养组织中也见到大量呈圆形无突起的神经元细胞,表明在共培养组织中低浓度组KLT具有抑制肿瘤细胞的效果。8.不同浓度KLT作用于神经母细胞瘤N18TG2细胞与中脑组织共培养中,结果表明,KLT各作用组对多巴胺能神经元、神经元和神经胶质细胞的数量大大增加,且细胞胞体和突起较平滑,突起数目较多,较长,神经元突起构成的网络较清晰。表明KLT能很好地保护中神经细胞。9.建立了S37肿瘤模型鼠,将48只S37荷瘤小鼠随机分成4组,即对照组、NDV治疗组、康莱特治疗组和NDV联合康莱特治疗组。体内抗肿瘤效果表明,随时间延长,肿瘤组织生长缓慢、肿瘤细胞发生溶解、核固缩、坏死区可见到大量的淋巴细胞,三种药物具有显著地抗肿瘤作用,其中NDV弱毒和康莱特注射液联用组的抗肿瘤效果最好,康莱特组次之,NDV组稍差。其抗肿瘤作用机制有可能是三种药物提高了机体神经系统和免疫系统机能,破坏或减弱了瘤细胞的生长繁殖速度,引起瘤细胞凋亡和死亡,起到了抗肿瘤作用。10.建立了S37肿瘤模型鼠,将48只S37荷瘤小鼠随机分成4组,即NDV治疗组、苦马豆素组治疗组、NDV联合苦马豆素治疗组和对照组。体内试验结果表明结果表明,随时间延长,肿瘤组织坏死严重、肿瘤细胞发生溶解、核固缩、坏死区可见到大量的淋巴细胞,三种药物具有显著地抗肿瘤作用,其中NDV弱毒和SW联用组的抗肿瘤效果最好,NDV组次之,SW组稍差。其抗肿瘤机制可能与三种药物均能刺激并提高机体免疫系统和神经系统机能,抑制或直接杀伤了肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞凋亡或坏死,起到了抗肿瘤作用。