论文部分内容阅读
迷迭香(RosmarinusOfficinalSL),是一种天然药用植物,富含多种活性成分,并具有很强的抗氧化性,在食品、油脂、医疗保健、日化等领域都有十分广泛的应用。因此,迷迭香活性成分的提取技术和应用开发受到了国内外广泛关注,已成为世界各国医药研究方面一个新的焦点。鼠尾草酸是迷迭香新鲜叶子中主要的脂溶性活性成分,在加工过程中易转化为其它成分,具有不稳定性,导致在制备和保存上存在一定的难度。另外,鼠尾草酸是迷迭香脂溶性抗氧化剂的重要质量指标,但脂溶性迷迭香抗氧化剂的抗氧化性能与鼠尾草酸的含量并非线性相关性,而与脂溶性的二萜酚类物质的总量有很好的线性相关性。为了解决目前鼠尾草酸产品纯度低的问题,探究鼠尾草酸的性质,本文以迷迭香提取物为原料,对其中鼠尾草酸的分离纯化方法、稳定性、变性机理以及抗氧化性能进行研究,具体内容如下: 1、建立了鼠尾草酸含量的高效液相色谱法(HPLC)分析条件:通过对已有分析方法的归纳和总结,建立了鼠尾草酸含量的HPLC色谱条件:色谱柱:DELTAPAKC18(5μm,150×3.9mmID);流动相:甲醇和0.5%磷酸水溶液(v∶v=80∶20);流量:1mL/min;柱温:室温;检测波长:284nm;进样量:20μL。分析方法的文献报道以及鼠尾草酸的稳定性结果表明:在分析测定鼠尾草酸时,如需长时间保存样品溶液,用乙腈作为溶剂较好;短时保存样品溶液的分析中,可用甲醇或者乙醇作为溶剂。 2、考察了鼠尾草酸的溶剂稳定性: 将89%鼠尾草酸溶于几种常见溶剂中,在常温下考察鼠尾草酸的溶剂稳定性。研究表明,在乙腈溶剂中,鼠尾草酸具有良好的溶解性和稳定性,即使放置30天,其含量也变化很小。在其它溶剂中,鼠尾草酸的含量均有不同程度的降低趋势。乙腈能够有效地保持鼠尾草酸的稳定性,说明鼠尾草酸在氰基环境中稳定性较好,如果不考虑溶剂残留以及成本问题,在分离提取鼠尾草酸时使用乙腈,再改善层析硅胶和洗脱液的环境,对提高鼠尾草酸纯度有重要作用。 3、研究了鼠尾草酸的分离纯化方法: 基于鼠尾草酸的稳定性实验,本文研究了三种鼠尾草酸的分离纯化方法: (1)半制备反相高效液相色谱法难以分离出高纯度的鼠尾草酸。 (2)吸附磷酸硅胶柱层析法的最佳条件为:洗脱液:乙酸乙酯与正己烷的比例为10∶90(v/v);硅胶粒度为200-300目;磷酸添加量:磷酸与硅胶的比例为2∶40(v/w);径高比为1∶10;最佳流速为6mL/min;最佳负载量:粗提物与硅胶的比例为0.2∶20(g/g);经分离纯化后得到鼠尾草酸的纯度为92%。 (3)2-氰基乙基硅烷键合固定相柱层析法的最佳条件为:以常压玻璃柱为色谱柱,迷迭香提取物的质量为0.2g,20g2-氰基乙基硅烷固定相为固定相,径高比1∶10,洗脱液为乙腈与正己烷(v∶v∶3∶97),流速6mL/min,经分离纯化后得到鼠尾草酸的纯度为93%, 半制备法的分离效果差,原因是高极性的含水洗脱液难以长时间保持鼠尾草酸的稳定性。另外两种分离方法中,基于鼠尾草酸在酸性和乙腈中更稳定的性质,分别用吸附磷酸的硅胶以及2-氰基乙基硅烷键合固定相作为层析固定相,洗脱液是低极性的溶剂,有效地通过改善层析硅胶以及洗脱液的环境来保持鼠尾草酸稳定性,达到了鼠尾草酸组分流出快、时间短、含量高的目的。 4、研究了鼠尾草酸的变性机理: 利用HPLC-MS检测保存10天的鼠尾草酸甲醇溶液。结果表明,氧化后的鼠尾草酸溶液中含有鼠尾草酚等酚类物质,体现了溶剂稳定性研究结果。利用物质结构的相互关系,初步推导出鼠尾草酸向部分次生产物转化的可能机理:变性发生后,从鼠尾草酸开始转化,结构逐渐发生改变,结构中的成单电子通过共振效应与苯环形成一个大π键,最后可能氧化形成带有一个羟基的半醌式结构。 5、研究了鼠尾草酸的抗氧化性能: 通过对主要次生产物结构的认定,结合稳定性考察结果,拟合出鼠尾草酸含量的表达式为Ct=C0/(1+kt)(k为鼠尾草酸的溶剂稳定性系数),推导出总酚含量表达式为Ct=CT-c,从理论上解释了鼠尾草酸含量与脂溶性迷迭香抗氧化剂的抗氧化性能并非线性相关性的原因。