目的:通过建立PCPA大鼠失眠模型,观察PCPA致失眠后大鼠大脑皮质信号分子P38MAPK、PKC、CaMKII mRNA和蛋白表达变化情况。脑室注射P2X受体拮抗剂以及P2X7受体拮抗剂和激动剂,观察大鼠P2X7受体在PCPA所致大脑皮质蛋白激酶活动变化中的作用。用SZRD进行干预,观察SZRD对失眠大鼠大脑皮质信号分子P38MAPK、PKC、CaMKII mRNA和蛋白表达的影响。方法:1.将健康清洁级SD大鼠随机分为正常组,手术对照组,PCPA组,PCPA+OXATP 组,PCPA+A438079 组和 PCPA+BzATP 组共 6 组,每组 6 只。除正常组外,其余每组动物进行脑室插管,脑室插管后动物需恢复7d后观察是否有无异常状况。然后采用连续3d腹腔注射PCPA的方法制备大鼠失眠模型。每只大鼠腹腔注射完毕后立即进行脑室注射,PCPA+OXATP组脑室注射P2X受体拮抗剂OXATP,PCPA+A438079组脑室注射P2X7受体拮抗剂A438079,PCPA+BzATP组脑室注射P2X7受体激动剂BzATP。采用RT-PCR以及Western blot法检测皮质组织P38MARK、PKC、CaMKII mRNA以及蛋白的表达。2.将健康清洁级SD大鼠随机分为正常组,手术对照组,PCPA组,PCPA+SZRD 组,PCPA+OXATP+SZRD 组,PCPA+A438079+SZRD 组,PCPA+BzATP+SZRD组,手术对照+SZRD组共8组,每组6只。除正常组外,其余每组动物均需要进行脑室插管,脑室插管后动物需要恢复7d。然后连续3d腹腔注射PCPA的方法制备大鼠失眠模型。正常对照组、手术对照组、手术对照+SZRD组按照同样的方法腹腔注射等体积的生理盐水。腹腔注射完毕后立即进行脑室注射,除PCPA+SZRD组与手术对照+SZRD组脑室注射生理盐水外,其余每组脑室注射药物及方法同实验一。区别在于在实验一的基础上进行SZRD(15 g·kg-1)灌胃治疗,连续7天。正常组,手术对照组,PCPA组按同体积生理盐水灌胃。灌胃完毕后,利用RT-PCR以Western blot及法测定各组大鼠大脑皮质P2X7受体后信号分子P38MAPK、PKC、CaMKII mRNA和蛋白的表达。结果:1.与手术对照组比较,PCPA组大鼠大脑皮质组织P38MARK mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01);与PCPA组相比,PCPA+OXATP组和PCPA+A438079组P38MARK mRNA及蛋白表达均明显下调(P<0.05);PCPA+BzATP组P38MARK mRNA及蛋白表达较PCPA组升高(P<0.05);与手术对照组相比,PCPA组大鼠大脑皮质组织PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01);与PCPA组相比,P2X受体拮抗剂组和P2X7受体拮抗剂组PKC、CaMK mRNA及蛋白表达均明显上调(P<0.01);P2X7受体激动剂组PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01)。正常组和手术对照组P38MARK、PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达相比无显著性差异。2.与PCPA组相比,PCPA+SZRD组P38MAPK mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),PKC、CaMKⅡ mRNA 及蛋白表达上调(P<0.01);与 PCPA+OXATP组比较,PCPA+OXATP+SZRD组P38MAPK mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),PKC、CaMKⅡ mRNA表达无明显差异(P>0.05),PKC、CaMKⅡ蛋白表达上调(P<0.01);与 PCPA+A438079 组比较,与 PCPA+A438079+SZRD 组 P38MAPK mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),PKC、CaMKⅡ mRNA表达无明显差异(P>0.05),PKC、CaMKⅡ 蛋白表达上调(P<0.01);与 PCPA+BzATP 组比,PCPA+BzATP+SZRD 组 P38MAPK mRNA 及蛋白表达上调(P<0.01),PKC、CaMKⅡ mRNA表达下调(P<0.01),PKC、CaMKⅡ蛋白表达上调(P<0.01);正常组与手术对照组比较,P38MAPK、PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05);手术对照+SZRD组与手术对照组比较P38MAPK、PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。结论:1.PCPA能导致失眠大鼠大脑皮质内P38MAPK mRNA及蛋白表达明显上调,PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达下调。2.P2X7受体介导了 PCPA所致的P38MAPK、PKC、CaMKⅡmRNA和蛋白的表达变化。3.SZRD改善失眠的机制很有可能是通过作用于P2X7受体下调P38MAPK mRNA及蛋白表达,上调PKC、CaMKⅡ mRNA及蛋白表达,从而改善失眠。