【摘 要】
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目的香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract, CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normal human b
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目的香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract, CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normal human bronchial epithelial Cells, NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况。方法用不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1两种不同的细胞系,用荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体,特异性的标记细胞核内的DNA双链断裂(DNA double-strand breaks, DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性。用免疫印迹检测γ-H2AX表达。同时,亚G1峰法(SubG1 peak)和Annexin V-FITC/碘化丙啶双染色检测CSE诱导的细胞凋亡。用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化。结果CSE作用后的细胞可引起DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4 h左右,然后逐渐降低。减少CSE浓度(20%),γ-H2AX的量可以持续增加达24 h左右。DNA损伤后平均12 h可以出现凋亡。MTT结果显示,CSE随剂量和时间依赖性的方式降低细胞活性。另外,共聚焦显微镜观察到细胞内的γ-H2AX的量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4 h后方可出现。结论CSE能直接引起NHBE和SPC-A1的DNA损伤和凋亡,且存在着剂量和时间依存关系。γ-H2AX为DNA双链断裂的标志。
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