论文部分内容阅读
目的 评价深低温保存兔眼及人眼角膜缘组织活性，以探讨深低温保存角膜缘组织应用于临床的可行性。 方法 3只健康新西兰大耳白兔(6只眼)，制备角膜缘组织片(约带2mm宽的周边角膜和2mm宽巩膜)，采用简化二步深低温保存法保存90天；取2只人尸眼角膜缘组织片(约带有2-3mm宽周边角膜及2-3mm宽巩膜)，来源于简化二步深低温保存法保存92天(1只眼)及726天(1只眼)的带巩膜环的角膜组织片。分别行光镜(HE染色、PAS染色)、透射电镜观察其组织结构及超微结构，酶组织化学染色[乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)]测定酶活性，并与新鲜眼角膜缘组织对比。 结果 ①光镜下，简化二步深低温保存兔及人角膜缘组织上皮层形态完好，细胞排列紧密，深层柱状上皮细胞胞浆少、核小、染色深。部分上皮从上皮下乳头间向下突出，每隔1-2mm横过角膜缘，呈放射状排列，形成“Vogt栅栏”。有色素颗粒沉着。未见细胞膜破裂，细胞浆均匀，未见空泡形成，细胞核未见脱失，基底膜完整，呈波浪状。基质层为疏松的纤维组织，胶原纤维排列不规则，直径粗细不均。可见血管。兔及人角膜缘上皮层PAS染色阴性；与其毗邻的角膜侧上皮层PAS染色阴性；巩膜侧上皮层偶见PAS染色阳性。②电镜下，简化二步深低温保存兔及人角膜缘组织上皮层细胞胞膜完整，上皮层表面有微绒毛和微皱褶，上皮细胞之间可见多数桥粒及半桥粒连接，细胞连接完好，底部柱状细胞为单层细胞，排列不规则，其基底连同上皮基底膜呈波浪状。胞质致密，细胞内器丰富，含有高浓度的线粒体、高尔基复合体、内质网及细丝状结构。部分线粒体肿胀，少数嵴断裂，内质网池轻度扩张。胞质内可见色素颗粒。核完整，形状不规则，核膜清晰，染色质分布均匀，中文摘要变化不明显。③简化二步深低温保存兔及人角膜缘组织上皮层LDH、SDH的酶组织化学测定可见上皮细胞内LDH为蓝色反应颗粒，分布于细胞质中;SDH为紫蓝色反应颗粒，分布于细胞质中。与新鲜角膜缘组织相比其活性无显著性差异(P>0.05)。 结论深低温保存法能保存角膜缘组织活性;能随时按需要为临床提供活性角膜缘组织材料;为深低温保存角膜缘干细胞移植治疗临床眼表疾病提供了实验依据。