腺病毒介导的hIL-10抗大鼠肝损伤的体内及体外研究

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目的:探讨腺病毒介导的hIL-10对大鼠肝损伤的保护作用。在体外细胞模型实验中,探究腺病毒介导的人白细胞介素-10(hIL-10)是否能对损伤的培养肝细胞发挥抗炎保护作用;在体内实验中,探究携带hIL-10基因的腺病毒的转染效率,以及对损伤的大鼠肝组织有保护作用。  方法:首先构建携带hIL-10的腺病毒载体。在体外实验中,先利用四氯化碳(CCl4)诱导肝细胞损伤模型,并在实验保护组细胞中,先加入腺病毒载体,培养24小时,观察细胞存活率。在体内实验中,向CCl4诱导的肝损伤模型大鼠尾静脉中注射包含腺病毒介导的hIL-10的林格液,观察其与对照组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝纤维化四项指标(血清透明质酸、层粘连蛋白、III型前胶原、IV型胶原)以及病理结果对比;以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为荧光标记,观察腺病毒的转染效率;并使用Elisa,Western Blot检测hIL-10在大鼠血浆内的表达情况。  结果:在体外实验中,大鼠肝细胞加入CCl4至终浓度0.5mol/L后,细胞出现明显的损伤,细胞存活率下降至59%至72%之间,与空白对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。当细胞预先以MOI=1、5、10、50的感染强度感染病毒Ad5-hIL10,再加CCl4诱导剂,则细胞存活率随MOI值升高而增加,至MOI=50时,细胞存活率恢复至92%。在体内实验中,通过尾静脉向大鼠体内注射含有腺病毒介导的hIL-10的林格液,发现一周之后,经过处理大鼠的ALT和AST都明显低于没有经过处理的大鼠,且除IV-C之外,经过处理的大鼠肝纤维化其他指标都明显低于没有经过处理的大鼠,病理学结果证明了此种处理方法能够减轻CCl4对肝脏的损伤作用,减轻肝纤维化程度。研究同时发现,携带腺病毒介导的hIL-10可以高效率转染肝细胞,如本实验的研究结果所示,荧光显微镜下发现EGFP表达阳性的细胞平均为51.2%。但hIL-10体内维持的时间并不长,通过Elisa和Western Blot,发现在8小时血浆中的hIL-10表达量达到顶峰,随后就呈下降趋势,1周之后,血浆中基本代谢完全。而且,向大鼠尾静脉注射腺病毒这种方法安全有效,经过处理的大鼠死亡率为0%,生存状态明显好转。  结论:腺病毒介导的hIL-10对肝损伤大鼠有较好的保护作用,而且此技术很安全。所以腺病毒介导的hIL-10对肝损伤以及肝纤维化的治疗有广阔的应用前景。
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