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目的:默克尔细胞在皮肤的触觉传导机制中起着重要的作用。雪旺氏细胞(SCs)是创伤后神经纤维再生的重要细胞。外泌体中的各种因子可以促进创面愈合。触觉功能障碍是否与全层皮肤缺损中默克尔细胞(MCs)缺失或Piezo2离子通道功能障碍有关,外泌体又是否可以促进创面触觉的恢复,其分子机制尚不清楚。本研究旨在通过MCs中Piezo2离子通道的功能来确定雪旺氏来源的外泌体是否在全层皮肤创面触觉恢复中发挥作用。方法:1)采用消化法从与动物模型同基因型新生SD大鼠皮肤内和坐骨神经内分别提取、培养MCs和SCs,采用免疫荧光法及WB测定MCs中CK20及Piezo2和SCs中S-100、GFAP及P75的表达。ELISA法检测培养至第0d、2d、4d、6d的MCs中分泌CGRP情况。2)提取SCs和MCs(control组)外泌体分别与MCs共培养,分为三组:MCs组、MCs+exosome+control组和MCs+exo-SCs组;提取三组中蛋白检测Piezo2的含量并在RNA水平上检测Piezo2 m RNA的表达。用WB法及q PCR法检测MCs组、MCs+SCs组及MCs+SCs+GW4869组中的Piezo2的表达量。同时使用ELISA对MCs单独培养组、MCs+exosome+control组和MCs+exo-SCs组中CGRP的含量进行检测。3)建立大鼠足底创面模型后将动物随机分为五组:(A)Shame;(B)Model;(C)Model+MCs;(D)Model+SCs;(E)Model+MCs+SCs。进行行为学检测,用棉拭子进行缩足检测和Von Frey纤维测定缩足反射阈值。4)取大鼠足底组织制作石蜡切片,免疫组化检测MCs相关蛋白的表达,WB检测组织中Piezo2的表达情况。结果:1)采用酶消化法获得MCs和SCs,细胞免疫荧光及WB检测MCs标志性蛋白CK20高表达于成纤维细胞;qPCR检测Piezo2高表达于MCs;ELISA法检测培养第0d、2d、4d、6d MCs细胞分泌的CGRP含量随时间的延长逐渐增加,间接验证该细胞为MCs并提示MCs的增殖情况。细胞免疫荧光及WB检测SCs标志性蛋白呈强阳性。2)Exo-SCs可诱导MCs中Piezo2的表,ELISA法结果同样显示MCs+exo-SCs组中CGRP含量增加。Western blot及q RT-PCR结果显示,MCs+SCs共培养后可以上调Piezo2的表达,而MCs+SCs+GW4869组可以抑制MCs中Piezo2的表达。3)棉签收缩率检测结果显示,Model+MCs+SCs组的收缩率随时间的延长明显高于Model+MCs组和Model+SCs组。机械戒断阈值(MWT)检测显示除了sham组外,其他各组MWT均显著下调,但Model+MCs+SCs组MWT高于Model+MCs组。4)石蜡切片免疫组化染色显示与Model+MCs组相比,Model+MCs+SCs组的CK20及Piezo2染色阳性更高,WB检测发现与Model+MCs组相比,Model+MCs+SCs组的Piezo2表达水平升高。结论:雪旺细胞来源外泌体可能通过上调默克尔细胞中Piezo2离子通道蛋白的表达促进全层皮肤创面触觉的恢复。