目的:1.研究HER2对骨肉瘤增殖,迁移、侵袭能力的影响。2.研究HER2是否通过PI3K/AKT通路调节PCNA,MMP2的表达,从而促进骨肉瘤增殖,迁移及侵袭。方法:1.应用Western Blot从MG63,Sa OS2,HOS,U2OS这4种骨肉瘤细胞中分别筛选出HER2表达量最高和最低的细胞株。2.HER2干扰慢病毒转染HER2表达量最高的细胞株,HER2过表达慢病毒转染HER2表达量最低的细胞株。3.Western blot技术分别检测细胞转染HER2干扰慢病毒和HER2过表达慢病毒后HER2蛋白表达变化,验证HER2是否成功敲低或过表达。4.CCK8法观察细胞增殖能力变化。5.划痕试验观察细胞迁移能力变化。6.Transwell法观察细胞侵袭能力变化。7.Western blot技术分别检测转染HER2过表达慢病毒后骨肉瘤HOS细胞以及往HER2过表达的骨肉瘤HOS细胞加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后p AKT473、p AKT308、AKT、PCNA、MMP2蛋白表达变化8.绘制裸鼠肿瘤生长曲线观察HER2表达对裸鼠移植瘤生长的影响9.免疫荧光观察裸鼠移植瘤中PCNA、MMP2蛋白的表达结果:各组骨肉瘤细胞均有HER2蛋白表达,骨肉瘤MG63细胞中HER2表达量最高,骨肉瘤HOS细胞中表达量最低。转染HER2干扰慢病毒后HER2蛋白表达显著降低,转染HER2过表达慢病毒后HER2蛋白表达显著升高。抑制HER2表达后观察到骨肉瘤MG63细胞的增殖,迁移、侵袭能力减弱;增强HER2表达后观察到骨肉瘤HOS细胞的增殖,迁移、侵袭能力增强。过表达HER2后p AKT473,p AKT308,PCNA、MMP2表达增多,而加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后可阻断上述蛋白的增加,同时阻断HER2过表达促进骨肉瘤HOS细胞增殖,迁移、侵袭的效应。体内抑制PI3K/AKT通路可阻断HER2促进骨肉瘤生长的效应,同时恢复PCNA、MMP2的表达。结论:HER2在骨肉瘤中通过PI3K/AKT通路促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,来发挥致瘤作用。