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目的目前普遍认为细胞连接的破坏,与肿瘤细胞的浸润和转移与细胞间的黏附力丧失相关[1]。黏附连接和紧密连接两种连接方式是上皮细胞之间的黏附主要方式,其中紧密连接位于细胞的侧面顶端,维持细胞间离子及分子的选择性渗透。在紧密连接处存在一个有3种已知的跨膜蛋白组成的整合体,包括闭锁蛋白、连接黏附分子和Claudin蛋白。Claudin蛋白是紧密连接的主要成分,并主要通过蛋白激酶途径参与细胞与细胞之间的信号转导。近来有研究报道,Claudin蛋白的异常表达与恶性肿瘤的进展相关[2]。Claudin-1是一种紧密连接蛋白,属于claudin家族成员,在肝脏中高度表达,其他上皮组织中也有表达[3]。近年来研究发现,claudin-1的异常表达与肿瘤的发生密切相关,成为肿瘤领域研究的热点[4]。本实验构建了人claudin-1基因的真核表达载体,转染HepG2细胞,为研究claudin-1在肝癌增殖转移过程中的作用提供了很好的研究对象。构建pDsRED1-Claudin-1重组质粒,并在HepG2肝癌细胞中进行表达。方法采用提取HepG2肝癌细胞总RNA,利用RT-PCR技术合成Claudin-1基因,使用XhoI和BamHI酶切消化PCR产物及pDsRED1-N1载体,回收目的片段及载体,T4连接酶4℃连接过夜,转化到DH5α感受态细菌,挑克隆,PCR及酶切筛选和鉴定重组质粒pDsRED1-Claudin-1,通过脂质体法转染HepG2肝癌细胞后,进行荧光检测和Western blot分析。结果成功构建真核表达质粒pDsRED1-Claudin-1,转染HepG2细胞后,经荧光检测和Western blot分析可见Claudin-1红色荧光融合蛋白正确表达。结论成功提取HepG2细胞总RNA,利用RT-PCR技术获得Claudin-1编码基因,使用Xho I和Bam HI酶切消化PCR产物及pDsRED1-N1载体,构建重组质粒,经过Xho I、Bam HI酶切,蛋白电泳验证。成功构建含Claudin-1 ORF基因的红色荧光蛋白报告载体,并在HepG2肝癌细胞中正确表达。