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背景与目的：肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC,简称肝癌)是我国常见恶性肿瘤之一,好发于男性,我国每年约有23万人死于肝癌,占全世界肝癌死亡人数的55%。由于起病隐匿,早期症状不典型,进展迅速,且多数肝癌在诊断时已处于晚期,因常伴有肝硬化背景,仅有20%患者有机会接受根治性治疗手段,多数患者因肿瘤转移而失去治疗机会。然而在这些能够接受根治性治疗的患者,其总体疗效仍不理想,术后的高转移复发率已成为肝癌治疗的瓶颈。肿瘤的发生、发展是一个多基因参与、多环节、多阶段的复杂过程。肿瘤微环境是肿瘤在其发生过程中所处的内环境。微环境中的多种免疫细胞、炎性细胞、脂肪细胞、胶质细胞、平滑肌细胞等可以被肿瘤细胞诱导,在其周围产生大量的生长因子、细胞趋化因子以及基质降解酶,有利于肿瘤细胞的增殖和侵袭。缺氧是实体肿瘤的特征之一,研究认为缺氧微环境可以诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)、新生血管生成和肿瘤侵袭、转移,与预后不良密切相关。缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor, HIF)是缺氧状态下产生的最重要的一类内源性转录因子,是介导生理性和病理性低氧反应的关键转录因子,在缺氧环境中表达显著。当前的研究已证实,HIF-1α可直接调控数十种目的基因,是缺氧影响组织代谢和微环境的主要枢纽,在缺氧诱导的基因表达调节中起着关键作用,并不断有新的目的基因被发现。CXCL6(C-X-C motif ligand 6)又名粒细胞趋化蛋白-2 (granulocyte chemotactic protein-2, GCP-2),是ELR (+) CXC趋化因子重要成员,具有趋化粒细胞、促血管生成、抗菌和调节免疫等功能。已有研究表明,缺氧可诱导小细胞肺癌自分泌CXCL6,且在CXCL6的启动子低氧反应元件(hypoxia response element,HRE)上发现有HIF的结合位点。但CXCL6在肝癌发展中的作用仍知之甚少。本研究中着重探索HIF-1α在肝癌复发转移中的作用机制,为肝癌的诊断和治疗提供新的线索。方法：利用qRT-PCR和蛋白印迹法检测肝癌细胞系和人肝细胞系中HIF-1α的mRNA表达水平和蛋白表达水平；制备组织芯片,使用免疫组化的方法检测肝癌组织中HIF-1α的表达水平,并与患者的临床资料进行分析,了解HIF-1α的表达与肝癌预后的关系；采取基因沉默策略,构建短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA) HIF-1α的重组质粒,转染肝癌细胞,下调HIF-1α的表达,构建HIF-1α基因过表达慢病毒质粒,感染肝癌细胞,使HIF-1α基因过表达,检测下调及过表达HIF-1α后CXCL6的mRNA水平和蛋白表达水平。将肝癌细胞分三组：对照组,过表达HIF-1α组,过表达HIF-1α+CXCL6中和抗体组,利用划痕实验和Transwell小室法观察并对比肝癌细胞的迁移和侵袭能力；构建HRE-LUC荧光素酶报告基因载体,证实在肝癌细胞中CXCL6基因转录启动子区域存在HIF-1α转录因子的结合位点,运用染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation, ChIP)方法,了解HIF-1α是否参与了CXCL6基因的表达调控；建立MHCC97H和MHCC97H-HIF-1α-shRNA细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察肿瘤细胞的成瘤性,肿瘤生长曲线；使用免疫组化的方法检测肝癌组织中CXCL6的表达水平,将结果与患者临床资料进行分析,了解CXCL6的表达水平与肝癌预后的关系。结果：(1)肝癌细胞系中HIF-1α和CXCL6在mRNA和蛋白水平高于人正常肝细胞系,差异有统计学意义。缺氧条件下,肝癌细胞系中HIF-1α和CXCL6的表达水平增高,且呈时间依赖性。HIF-1α的表达增高与微血管浸润、TNM分期相关。(2) HIF-1α在转录水平上调控CXCL6的表达,从而影响肝癌细胞的侵袭、迁移能力。(3) HIF-1α基因敲除能显著抑制裸鼠移植瘤的生长。CXCL6高表达的肝癌患者术后生存率明显低于低表达者,且复发率明显高于低表达者。结论：本研究发现HIF-1α参与了CXCL6的基因表达调控,HIF-1α通过调节CXCL6增强肝癌细胞的侵袭和迁移能力。肝癌组织中CXCL6表达升高与预后不良相关,在缺氧导致肿瘤进展、远处转移的过程中起关键作用。目的：观察拉米夫定联合肝动脉化疗栓塞术(transarterial chemoembolization, TACE)治疗伴有乙肝病毒复制的原发性肝癌的治疗效果。方法：随机选取2008年7月至2011年10月在我院接受TACE治疗的乙肝病毒活动的肝细胞肝癌患者181名,随机分为两组,92名患者接受拉米夫定+TACE治疗,对照组89名给予TACE治疗。观察治疗前和治疗后肝功能、HBVDNA水平,每3个月随访一次,对拉米夫定联合TACE治疗乙肝病毒复制的原发性肝癌的效果进行评价。结果：拉米夫定治疗组有42名患者(45.6%)乙肝病毒定量检测转为阴性,对照组10名(11.2%),两组对比,有统计学差异(P<0.001)。中位疾病进展时间(TTP)拉米夫定组和对照组分别为8.2个月和4.3个月(P=0.005),拉米夫定是TTP相关的独立保护因素。拉米夫定治疗组的1年、2年及3年生存率分别为83%,69%,58%,对照组为60%,48%,48%,两组相比差异显著(P=0.002)。多因素Cox回归模型分析显示拉米夫定治疗和AFP水平是总生存率的两个独立预测因素。结论：拉米夫定联合TACE治疗可抑制乙肝病毒活性,提高肝癌TACE患者的生存率。拉米夫定治疗和AFP水平是影响总生存率的两个独立因素。