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五味子始载于《神农本草经》,为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实,习称“北五味子”。其味酸、甘,性温,归肺、心、肾经,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效。五味子的药用历史悠久,因极高的药用价值,倍受历代医家推崇,且入滋补药以北产者乃良。五味子主要含有木脂素、挥发油、三萜、黄酮、有机酸、多糖类等化学成分,但一直以来对其研究主要关注在木脂素、挥发油类成分,较少有关于醋蒸前后五味子多糖的化学变化及其相关活性的研究。五味子富含多糖类成分,总多糖约占化合物的7～9%,本文首次以醋蒸前后五味子多糖组分及其保肝活性为研究对象,对醋蒸前后五味子总多糖的提取、分离与纯化、化学成分及保肝活性进行初步研究,以期为醋蒸前后五味子活性多糖的合理开发利用提供参考。实验方法:1.依据2015年版《中国药典》第四部炮制通则,醋蒸法制得醋蒸五味子饮片。醋蒸前后五味子总多糖的提取方法采用水提取醇沉法;其总糖含量测定采用苯酚-硫酸法;糖醛酸含量测定采用硫酸-咔唑法;蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法。2.采用Amberlite FPA90-Cl~-串联Amberlite FPC-3500弱阴+弱阳离子交换树脂色谱柱法、DEAE Cellulose-52离子交换纤维柱层析法、DEAE-Sepharose F.F凝胶柱层析法,对醋蒸前后五味子总多糖进行分离纯化,所得组分经HPLC法检测鉴定其纯度。3.所得醋蒸前后五味子各均一多糖组分采用HPLC法测定分子量;采用PMP柱前衍生化-HPLC法分析各均一多糖组分的单糖组成。4.采用LPS联合D-GalN腹腔注射所致小鼠免疫性肝炎模型,分别口服灌胃给药浓度为400 mg/kg的生品、醋蒸品五味子多糖溶液进行预保护。计算各实验组小鼠肝指数、脾指数、胸腺指数;苏木精-伊红HE染色法观察肝组织病理变化;微板法检测肝组织匀浆液中ALT与AST的含量;酶联免疫法检测血清中TNF-α与IL-1β的含量。实验结果:1.水提取醇沉法得到的生品、醋蒸品五味子总多糖产率分别为原药材的9.35%与7.24%,生品五味子总多糖呈棕色絮状固体,醋蒸品五味子总多糖呈深棕色絮状固体,二者均易溶于水,极易溶于热水,不溶于有机试剂;经检测,生品、醋蒸品五味子总多糖中所含总糖含量分别为79.36%与76.74%,糖醛酸含量分别为36.14%与38.57%,蛋白含量分别为6.98%与7.02%。2.醋蒸前后五味子各均一多糖的分离纯化:生品、醋蒸品五味子总多糖经Amberlite FPA90-Cl~-串联Amberlite FPC-3500弱阴+弱阳离子交换树脂色谱柱分离得到的多糖组分经纯度鉴定均为杂多糖;经DEAE Cellulose-52离子交换纤维柱层析法、DEAE-Sepharose F.F凝胶柱层析分离纯化后,经纯度鉴定共得到四个纯化均一多糖组分,分别记为生品中SP-1和SP-4、醋蒸品中VSP-1和VSP-2。其性状为淡黄色或土黄色或棕色粉末,均可溶于水,极易溶于热水,不溶于有机试剂。3.醋蒸前后五味子各均一多糖的化学组成初步分析:经检测四种均一多糖的分子量及单糖组成可知,SP-1组分分子量为1.06×10~9Da,其单糖组成及摩尔比为Rha:GalUA:Glc:Gal:Ara=5.94:11.25:19.1:13.49:4.93;SP-4组分分子量为6.05×10~8Da,其单糖组成及摩尔比为Man:Rha:GalUA:Glc:Ara=12.68:20.41:0.71:36.79:3.51;VSP-1组分分子量为2.17×10~8Da,单糖组成及摩尔比为Rha:GalUA:Glc:Xyl=14.92:9.75:38.45:4.61;VSP-2组分分子量为1.70×10~8Da,单糖组成及摩尔比为Man:Rha:GalUA:Glc:Ara=34.27:1.82:15.56:142.33:62.94。4.小鼠肝指数、胸腺指数、脾指数、肝组织病理切片、AST与ALT含量、TNF-α与IL-1β含量测定结果表明:醋蒸品五味子多糖可显著降低免疫性肝炎小鼠的肝指数、胸腺指数、脾指数,可改善肝组织的病理损伤,下调体内ALT与AST、TNF-α与IL-1β的含量,其预防效果明显优于生品五味子多糖。实验结论:本文对生品、醋蒸品五味子多糖进行初步研究,通过比较分析醋蒸前后五味子多糖的变化,证明了醋蒸品五味子多糖的颜色及化学组成均不同于生品;通过保肝活性试验说明了五味子的保肝活性成分并不仅仅是木脂素类,多糖类成分也为五味子保肝作用的物质基础,且醋蒸增强了生品五味子多糖的保肝活性。可为醋蒸前后五味子活性多糖有效组分的结构分析、阐明其药效学作用机制及合理开发利用提供参考。