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背景与目的：结肠癌是消化系统最常见肿瘤之一，转移或复发主要归咎于化疗药物耐药引起。标准化疗后产生的肿瘤细胞耐药性，仍然是临床治疗的难题。Notch信号途径是一种进化保守的细胞间相互作用的传导信号通路，影响细胞的分化、发育及凋亡[2]。近年发现，Notch信号转导途径也与许多肿瘤的发生和发展关系密切，在许多肿瘤细胞系中检测到Notch基因表达的异常，Notch途径在维持肿瘤表型方面起着重要作用。γ分泌酶作为一种notch信号途径重要的调节剂。γ分泌酶抑制剂（GSI）作用于Notch1的第三步酶切反应，导致NOTCH1的胞内段NICD释放受阻，从而对细胞的增殖分化造成影响。本实验采用低剂量浓度奥沙利铂(Oxaliplatin，LOHP)对结肠癌SW480细胞进行诱导化疗，构建sw480/L-OHP耐药细胞株。研究Notch1在结肠癌亲本细胞与结肠癌耐药细胞之间表达差异，探讨应用GSI阻断Notch1途经后对结肠癌细胞耐药的影响。方法：第一部分结肠癌耐药细胞的建立及鉴定。1、应用人结肠癌细胞系sw480，以反复诱导、逐渐递增奥沙利铂(L-OHP)浓度的方法，体外连续培养建成一株sw480／L-OHP。2、用CCK8法检测细胞株对奥沙利铂耐药指数，3、以reverse transcription PCR （RT-PCR）法评价notch1，hes1,cyclinD1，survivin的mRNA表达水平。4、western blot检测NOTCH1表达差异。第二部分γ分泌酶抑制剂阻断Notch1途径对sw480/L-OHP耐药细胞化疗敏感性研究将耐药细胞分成A组（对照组）、B组（单用L-OHP组）、C组（单用γ分泌酶抑制剂(gamma-Secretase Inhibitor,GSI)组）、D组（GSI联合L-OHP组），分别进行不同处理。1、 CCK-8法检测抑制率，2、用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。3、检测notch1，hes1，cyclinD1，survivin基因的mRNA表达水平4、 Western blot检测NOTCH1，Notch-1intracellular domain（NICD），HES1蛋白表达。结果：第一部分结肠癌sw480/L-OHP耐药细胞的建立及鉴定。1、成功培养建成一株sw480／L-OHP。2、用CCK8法检测细胞株对奥沙利铂耐药指数16.36，3、 reverse transcription PCR （RT-PCR）法notch1， cyclinD1，survivin的mRNA表达水平。结果显示：相比亲本细胞sw480/L-OHP耐药细胞survive、cyclinD1的mRNA表达增高。4、western blot检测NOTCH1表达上调。第二部分γ分泌酶抑制剂阻断Notch1途径对sw480/L-OHP耐药细胞化疗敏感性研究1、CCK-8法检测抑制率，2、用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。采用金正均法[6]计算，结果显示两药合用具有协同作用。3、检测notch1，hes1，cyclinD1，survivin基因的mRNA表达水平。survivin、hes1和cyclinD1基因表达情况：与对照组相比较：在单用GSI组表达下调，在联合奥沙利铂以后，基因表达下调更明显；而在单用奥沙利铂组，没有明显变化。4、Western blot检测NOTCH1，Notch-1intracellular domai（nNICD），HES1蛋白表达。NOTCH1蛋白在四组中，无论是单用奥沙利铂还是单用GSI，还是联合使用，对总的NOTCH1的表达都没有影响。与对照组相比较，NICD和HES1蛋白表达在单用GSI组表达下调，在联合奥沙利铂以后，下调更明显；而在单用奥沙利铂组，没有明显变化。结论：本实验利用低剂量浓度奥沙利铂成功诱导结肠癌细胞耐药，同时发现引起了Notch1的表达上调。GSI阻断了NOTCH1胞内段NICD的释放，影响了下游的Hes1基因蛋白的表达，影响细胞增殖。GSI和L-OHP联合使用对抑制sw480/L-OHP增殖并诱导其凋亡上具有协同作用。