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背景和目的血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增殖是高血压、动脉粥样硬化等血管重构性疾病发生发展的病理生理学基础。研究清楚诱导VSMCs异常增殖的因素和机制,对防治该类疾病有着重要的理论意义和科学价值。自噬是真核生物在应激状态下维持细胞内稳态的一种自我保护机制。自噬参与了多种细胞因子、血管活性物质、剪切应力、nc RNA等诱导的VSMCs增殖,一些调节哺乳动物细胞自噬的信号通路(如PI3K/AKT/m TOR)同时也是调节细胞增殖的重要信号通路。血管紧张素Ⅱ作为诱导VSMCs SS异常增殖的主要生物活性因子之一,通过氧化应激和JAK2-STAT3、p38MAPK、PI3K/AKt等多条信号转导通路促进VSMCs增殖。最新研究发现,AngⅡ可通过氧化应激和Rho A/Rho Kinase(ROCK)信号途径诱导VSMCs自噬。mi R-17-5p通过负向靶向调节STAT3,诱导低氧条件下的自噬发挥抗VSMCs SS凋亡作用。因此,本课题拟以人主动脉平滑肌细胞为研究对象,应用分子生物学方法探讨AngⅡ诱导STAT3信号通路对自噬的调节以及自噬对VSMCs增殖的影响,为阐明血管重构性疾病的病理生理机制提供实验数据。方法:(1)Western blot和LC3B蛋白turnover实验检测VSMCs自噬:(1)用不同浓度(0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L)AngⅡ处理VSMCs不同时间(0、6、12、24、36 h),Western blot法检测自噬标志性蛋白Beclin、LC3B-Ⅱ、P62的表达量。(2)设立control组、chloroquine组、AngⅡ组、AngⅡ+chloroquine组,Western blot法检测LC3B-Ⅱ蛋白的表达量。(2)MTT、Western blot检测VSMCs增殖:设立control组、氯喹组、AngⅡ、氯喹+AngⅡ组。MTT法检测细胞的增殖率、Western blot法检测PCNA蛋白表达量。(3)信号通路的研究:(1)WB法检测经不同浓度Ⅱ处理24的人主动脉血管平滑肌细胞内STAT3、P-STAT3 705蛋白表达量的变化;(2)设立control组、AngⅡ、AngⅡ+DMSO组、AngⅡ组+cryptotanshinone(STAT3Tyr705磷酸化抑制剂)组,Western blot法检测STAT3、P-STAT3、Beclin、LC3B-Ⅱ、P62、Atg7蛋白表达量。结果:(1)自噬标志性蛋白Beclin、LC3B-Ⅱ、P62的表达量在一定范围内随AngⅡ浓度(10-10~10-7mol/L)和处理时间(0~24h)增加而增加(P<0.05);与AngⅡ组相比,氯喹+AngⅡ组LC3B-Ⅱ蛋白表达量明显增多(P<0.05)。(2)PCNA的表达量在一定浓度范围内随AngⅡ浓度(10-10~10-7mol/L)和处理时间(0~24h)增加而增加(P<0.05);与AngⅡ相比,氯喹+AngⅡ组PCNA蛋白表达量下降(P<0.05)。(3)STAT3Tyr705磷酸化的比例呈AngⅡ剂量依赖性;与AngⅡ组相比,AngⅡ+cryptotanshinone组的Beclin、LC3B-Ⅱ、Atg7表达量明显减少(P<0.05)。结论:1.AngⅡ可能诱导VSMCs自噬。2.自噬可能正向调控AngⅡ诱导的VSMCs增殖。3.STAT3信号通路可能参与了AngⅡ诱导的VSMCs自噬。