第一章 肺缺血再灌注后NO、NOS及Ps的变化目的：研究肺缺血再灌注后血管壁NO、血浆NO、血管内膜上Ps表达，血浆Ps的动态变化，同时观察肺I/R损伤。方法： 1．共分四组 A组：对照组，对动物不做任何处理，其数值作为对照，而血浆中NO、Ps、血氧分压及湿/干重比率均取缺血前数值作对照。 B组：Sham组，术中仅行左侧开胸，左肺门穿带。 C组：I/R组，缺血60min后再根据再灌注时间不同分为5组，分别为再灌注30min、1h、3h、6h及12h。 D组：左肺I/R后右肺血管组，同样再分5组。 2．采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。 3．Ignarro和Shechter方法测定血管壁NO和血浆NO，免疫组化染色观察eNOS、iNOS、Ps表达强度，二位点酶联免疫法测定血浆Ps。 浙江大学博士学位论文 结果： 1．左、右两肺血管壁NO含量，eNOS、iNOS、Ps表达强度以及肺组织湿／干重比 率未见差异。 2．肺缺血再灌注后，血管壁NO和血浆NO含量均先下降，然后上升，至再灌注 后6h达到一高峰，12h时已经开始下降。 3．肺缺血再灌注后，eNOS初期表达下降，随后上升到 lh时达到高峰，随后下降， 而iNOS在lh后才逐渐上升，6h时达到高峰，12h时仍明显表达。 4．肺 k后，肺血管内膜上 Ps表达很快增强，并维持在高水平，而血浆 Ps到 lh 时才见到升高，并逐渐增加。 5．左肺W后，右肺血管壁NO含量也可见到轻度升高，但其升高的幅度和左肺 存在显著性差异。eNOS表达仅见到轻度增加，iNOS未见改变。 6．肺k后，肺组织湿仟重比率在再灌注后 3h开始增加，6h时达到高值，12h 又有所下降。 7．肺 k后，血氧分压在再灌注 3h后开始下降，到 6h下降到一最低值，12h时 己经开始好转。 8．肺IIR后，肺组织H－E染色可见肺泡组织水肿，增厚，炎性细胞浸润。而D组 （右肺）未见改变。 结论： 1．肺缺血再灌注后初期（＜30min），血管壁NO及血浆NO含量减少，但随着再 灌注时间延长，NO合成逐渐增加，到 12h后开始降低。 2．肺缺血再灌注初期（＜30min），eNOS表达下降，但随后表达逐渐增加，并维 持一较长时间，iNOS最初并不表达，到灌注后lh才表达明显增加，并持续较长时间。 3．肺缺血再灌注后，血管壁Ps表达很快明显增加（30min内），并持续表达，而 血浆 Ps后才开始逐渐升高，到 6h时达到一高值，并持续保持在高水平。 4．肺缺血再灌注后肺组织结构和功能受损表现为湿／干重比率上升，H．E染色示肺 泡间质水肿，增厚，并有中性粒细胞浸润，血氧分压下降。 一2一 浙江大学博士学位论文 5．一侧肺缺血再灌注后对对侧肺可造成一定影响，但尚未造成对侧肺组织学上变 化和氧合功能受损。 第二章 L飞 r g、L－NAME在肺缺血再灌注损伤中的作用 目的：探讨L－出g、L－NAME预处理对肺缺血再灌注损伤的影响。 方法： 1．实验分组：依随机原则分成四组 A组：小剂量卜y处理组（Lmp组），n＝30，此组在缺血再灌注前给予100mg／kg Lny（静脉推注），又分成凡。、R；、R3、u、R1。5组。 B组：大剂量卜山g处理组（L－y 11组），n—30，此组在缺血再灌注前静脉推注 100lllg／k L－用g后，静脉持续输注卜创g （10mg／k．min），又分成 Ro。、R；、R3、R6、 R12 5组。 C组：小剂量L－NAME处理组（LNAME组），n＝30，此组在I／R前静脉推注 10 1tiM LNAME，又分成 u。、R；、R3、R6、R；。5组。 D组：大剂量 LMME处理组（LJqAME 11组），n＝30，此组在 k前静脉推注 100 mM LMME，又分成 Ro。、RI、R3、R6、R12 5组。 2．实验中分别在缺血前给予不同的剂量卜p和LNAME预处理，余步骤同W 组，血管壁NO、PS和血浆中NO、PS检测及染色方法同第一章相应部分。 结果： 1．小剂量卜印g预处理后，再灌注初期血管壁NO和血浆中NO浓度均提高，而 大剂量卜巳g同时增加再灌注晚期血管壁NO合成和血浆NO浓度。