莱菔硫烷诱导人胃癌(SGC7901)裸鼠移植瘤细胞凋亡机制的研究

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目的:莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)是主要从十字花科蔬菜中提取的一种具有较强抗癌作用的植物化学活性物质。本实验通过建立胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,观察SFN对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤增殖和凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的分子作用机制,为胃癌拓展新的植物化学药物治疗提供实验依据。方法:BALB/C裸鼠20只,雄性,6周龄,16-20g,建立人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤模型,采用随机数字法随机分为对照组、SFN低、中、高剂量4组,待肿瘤直径长至约4mm大小时,采用腹腔注射给药的方法,分别注射生理盐水、SFN1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg,隔日给药1次,共6次。治疗后第16天以颈椎脱臼法处死裸鼠,测量各组移植瘤直径,计算瘤体积,快速剥离瘤体组织并称重。取移植瘤组织,制作石蜡切片,进行HE染色,采用光镜、透射电镜和TUNEL法分别检测移植瘤细胞增殖和凋亡情况。分别运用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测移植瘤细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达的变化。结果:1、1~10mg/kg浓度范围的SFN对人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤细胞有明显抑制作用,且随着SFN药物剂量的增加,抑瘤率明显增强,呈现一定的浓度依赖性。对照组、SFN低、中、高剂量治疗组抑瘤率分别为0、35.10%、56.98%、77.08%。2、透射电镜观察到在SFN作用后,移植瘤细胞呈现胞质浓缩,染色质浓缩边集,核膜破裂,而胞膜完整,可见典型的凋亡小体。3、TUNEL检测细胞凋亡,对照组、SFN低、中、高剂量治疗组细胞凋亡阳性表达率分别为11%、21%、29%、35%,随着SFN剂量的增加,凋亡率明显增加,呈现一定的剂量依赖效应,各治疗组与对照组相比,P均<0.05。4、半定量RT-PCR检测发现随着SFN剂量的增加,Bcl-2的mRNA条带强度递减,而Bax的mRNA条带强度随剂量增加而递增。5、免疫细胞化学结果显示SFN作用后,SGC7901裸鼠移植瘤细胞Bax蛋白阳性表达率明显增高,且随着SFN剂量的增加,蛋白阳性表达率进一步增强;而Bcl-2蛋白表达减少,且随着SFN剂量增加而蛋白阳性表达率进一步下降。结论1、SFN可抑制人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤细胞的增殖、抑制肿瘤新生血管生成和诱导胃癌细胞凋亡。2、SFN以剂量依赖的方式诱导人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤细胞凋亡。SFN可能通过抑制Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白的表达及活化,从而通过线粒体内源性途径诱导凋亡。3、SFN有望成为一种极具前景的胃癌治疗药物。
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