本课题对鹌鹑原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)的发生、迁移及性腺的分化和发育规律,在显微水平上进行了全面而系统的研究。试验的主要结果如下:1采用免疫组化的方法追踪鹌鹑胚胎早期PGCs发生和迁移的过程,染色结果观察显示,鹌鹑PGCs在未孵化期几乎都分布在胚盘暗区,主要在与明区相交界的部位,有分离的细胞也有成对存在的。孵化12h的胚盘,PGCs大多数位于明区,紧靠明暗交界区域,并有三个聚在一起出现的。孵化19h的胚盘,PGCs集中分布于胚体头前侧部的明区中,即生殖新月区。未分化期时的PGCs数为2~3个,到原条期已增至100多个,亦为PGCs的增殖高峰期。而在一体节之后,PGCs群落分布趋向于血管网的形成区域。孵化27h,已有少量PGCs分布于明区的血管中。到孵化36h时,有大量的的PGCs聚集在明区血管网中,左右两侧都有,PGCs数目为检测各个时期最多。孵化45h时,从头部到脐肠系膜PGCs均有散在和聚团分布,并主要聚集在头部间充质的血管中。2在对鹌鹑胚胎期性腺分化时间的研究中,观察到,孵化第4d,PGCs已经迁移到原始性腺内,并与其一起形成未分化的性腺。在孵化第5d时,性腺开始显现出卵巢和睾丸的特征。卵巢分化时可以明显观察到性腺上皮有一层PGCs大小样的细胞层,其与下层明显分为两部分,即致密的皮质层和疏松的髓质层;精巢分化时,上皮下为几层间充质细胞形成的早期白膜,使实质内细胞团与上皮分开,实质内的细胞团索有向早期曲精细管索发育的趋向。因此在组织学水平上,孵化第5d即为鹌鹑胚胎性腺分化的时间。3通过组织学方法观察鹌鹑胚胎各期睾丸的组织结构特征,研究睾丸的发育规律。结果表明:孵化第7~9d,睾丸的形态特征逐渐明显;孵化第10d,睾丸索形成并且PGCs分化为精原细胞;孵化第12d,精原细胞呈葡萄状或链状分布在曲精细管内,并有少量的成熟型间质细胞和血管填充于管腔之间;孵化第15d时,曲细精管明显变粗、数量增多,精原细胞进入有丝分裂而迅速增殖;到孵化结束第17d时,睾丸的形态趋于成熟,曲精细管清晰可辨,大量的间质细胞、结缔组织和血管填充于管腔内。4对鹌鹑胚胎期卵巢的连续切片进行H.E染色,结果观察到:孵化第7 d,右侧卵巢开始慢慢退化,极少数PGCs开始分化为卵原细胞;孵化10 d,卵巢明显区分为皮质和髓质部分,皮质部外区分布有大量增殖的卵原细胞群,呈合胞体结构;孵化11 d,卵原细胞数量增加,皮质部逐渐变厚,髓质部变小;孵化13 d,卵巢皮质部开始出现早期的原始卵泡;孵化14 d,卵巢皮质部出现大量原始卵泡,数量逐渐增多;孵化第17和出雏1 d时,卵巢的形态趋于成熟,观察到初级卵泡和次级卵泡,卵泡形态清晰,数量较多,卵泡间基质丰富,髓质中充满血管。5对于目前热点研究中的转基因技术,家禽中比较集中于鸡,鹌鹑作为实验动物的优点,是本实验选取其作为实验素材的原因。填补此空白并想在鹌鹑上进行相关转基因技术和胚胎干细胞技术,就必须对早期胚胎在体内发育的基本理论进行了解,系统的描述早期PGCs的起源、迁移和增殖规律,以及性腺分化和发育的规律。本实验确定了鉴定早期鹌鹑PGCs的优化方法,得到了很好的免疫荧光染色效果。