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研究背景弱视是视觉发育过程中常见的视力障碍性眼病。目前弱视发病机制的研究热点主要集中在关键期内视觉神经元突触可塑性,关键期后成年弱视的视觉突触可塑性及治疗却研究较少。研究证实PSD-95参与关键期视皮层可塑性的调节,丰富环境能使成年弱视大鼠视皮层可塑性重新再激活,而PSD-95在关键期后的表达规律是怎样的?反转缝合干预、反转缝合联合丰富环境干预成年弱视大鼠对其表达产生何种影响,两者影响有无差异?目前国内外尚无相关报导。目的本课题拟就关键期后单眼形觉剥夺性弱视大鼠PSD-95的表达情况,反转缝合干预、反转缝合与丰富环境联合干预成年弱视大鼠对PSD-95表达的影响,探讨PSD-95对成年大鼠视皮层可塑性的作用以及反缝合干预、反转缝合联合丰富环境干预对关键期后成年弱视大鼠视皮层可塑性的再激活作用。方法1.将14日龄健康未睁眼的SD大鼠随机分为8组：1-3组为正常对照组,4-8组为单眼剥夺组。剥夺组在生后14天行右侧眼睑缝合制备单眼剥夺模型,放于实验室标准环境下饲养,1-3组、4-6组分别于生后45d、60d、90d行图形视觉诱发电位(P-VEP)检测后处死；7-8组于60日龄时打开剥夺眼,缝合左侧眼睑行遮盖治疗,第7组放于实验室标准环境中饲养30d,即反转缝合组,第8组放于丰富环境中饲养30d,即反转缝合联合丰富环境干预组,此两组至90日龄行图形视觉诱发电位(P-VEP)检测后处死取材。2.应用HE染色法观察各组大鼠视皮层神经元的形态改变,采用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR (Real Time PCR)技术检测各组大鼠视皮层中PSD-95蛋白表达和PSD-95mRNA转录水平的变化。3.应用图像分析系统进行图像分析,所得各组数据利用SPSS17.0统计软件进行分析。同年龄段(45日龄、60日龄大鼠)正常组和剥夺组两组间比较采用两个独立样本t检验,90日龄大鼠4个样本间两两比较采用LSD法检验,P<0.05认为差异有统计学意义。结果1. P-VEP检测结果：各正常对照组大鼠P-VEP均具有稳定的波形、振幅潜时期。同年龄段剥夺组大鼠剥夺眼与正常组同侧眼相比,其P-VEP的P波不稳定,潜时期延长,波幅下降(P<0.05),从而证实形觉剥夺眼已产生弱视,弱视大鼠模型造模成功；同年龄段反转缝合干预组与剥夺组相比,P-VEP的P波不稳定程度减小,潜时期缩短,波幅升高(P<0.05),但与同年龄段正常组相比,P-VEP的P波仍不稳定,潜时期延长,波幅下降(P<0.05)；同年龄段反转缝合联合丰富环境干预组与反转缝合干预组、剥夺组相比,P-VEP的P波不稳定程度减小,潜时期缩短,波幅升高(P<0.05),与同年龄段正常组相比,其差异无统计学意义(P>0.05)。2.HE染色结果：光学显微镜下,大鼠视皮层神经细胞核染为蓝色,细胞质为红色,正常发育大鼠视皮层神经元分布呈层状,从皮质浅层至深层依次为分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层和多形细胞层,各层神经元排列整齐,单眼形觉剥夺组、反转缝合干预组、反转缝合联合丰富环境干预组大鼠对侧视皮层与正常对照组视皮层相比均未见明显异常。3.免疫组化结果：光镜下可见,大鼠视皮层PSD-95阳性反应产物呈棕褐色,主要分布在神经元胞体、树突、轴突。同年龄段剥夺组视皮层PSD-95呈阳性神经元密度降低(P<0.001)；同年龄段反转缝合干预组视皮层较剥夺组PSD-95呈阳性神经元密度增高(P<0.05),但仍低于正常组(P<0.05)；同年龄段反转缝合联合丰富环境干预组视皮层与剥夺组、反转缝合干预组相比,PSD-95呈阳性神经元密度增高(P<0.05),与正常组相比,其差异无统计学意义(P>0.05)4.实时荧光定量PCR结果：PSD-95mRNA在各组大鼠的视皮层中均有表达。同年龄段剥夺组视皮层PSD-95mRNA的相对表达量明显减少(P<0.001)；同年龄段反转缝合干预组视皮层较剥夺组PSD-95mRNA的相对表达量增多(P<0.001),但仍低于正常组(P<0.001)；同年龄段反转缝合联合丰富环境干预组视皮层与剥夺组、反转缝合干预组相比,PSD-95mRNA的相对表达量增多(P<0.001),与正常组相比,其差异无统计学意义(P>0.05)结论1.PSD-95可能参与调节关键期后成年动物的视皮层可塑性,成年动物视皮层仍存在一定的突触可塑性。2.反转缝合联合丰富环境干预对成年弱视大鼠视皮层可塑性的再激活作用比反转缝合干预明显,为临床成年弱视以健眼遮盖为基础的综合疗法提供了理论依据。