慢性鼻-鼻窦炎鼻窦粘膜细菌生物膜的激光扫描共聚焦显微镜观察目的以激光扫描共聚焦显微镜观察慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦粘膜中细菌生物膜的形态特点,研究细菌生物膜在慢性鼻-鼻窦炎患者中的阳性率,研究术前症状学SNOT-20评分、术前CT评分、术前药物治疗、是否伴有鼻息肉/息肉样变、是否伴有过敏性鼻炎、病程长短、有无鼻窦手术史等与细菌生物膜之间的相关性。方法选择2008年10月至2008年12月来我科就诊行鼻内镜手术的31例患者,其中包括27例符合EPOS-2007(European Position Paper on Rhinosinusitisand Nasal Polyps 2007)所提供诊断建议的慢性鼻-鼻窦炎患者,2例鼻咽纤维血管瘤患者,1例脑脊液鼻漏患者和1例单纯上颌窦囊肿患者。对患者进行详细的病史采集,包括既往有无鼻窦手术史,术前一月内有无使用激素类喷鼻剂或口服制剂,术前一月内有无使用抗生素类药物,是否伴有过敏性鼻炎等,对患者的慢性鼻-鼻窦炎症状进行SNOT-20评分;体格检查确定是否伴有鼻息肉;对术前鼻窦CT进行Lund-Mackay评分。次日行标准鼻内镜手术,术中取前筛或者后筛窦腔粘膜,2小时内以激光扫描共聚焦显微镜观察细菌生物膜形态特点,并根据其分布密度进行评分。所得数据及资料以SPSS11.5进行统计学分析:术前药物治疗、是否伴有鼻息肉/息肉样变或过敏性鼻炎、有无鼻窦手术史与细菌生物膜的相关性采用确切四格表检验法;术前症状学SNOT-20评分、术前CT评分、病程长短与细菌生物膜的相关性研究采用Pearson相关性分析。设P<0.05时为差异有统计学意义。结果以激光扫描共聚焦显微镜观察细菌生物膜可以见到,在5～10um大小的鼻窦粘膜细胞周围,直径为0.5～2um、棒状或球形呈现绿色荧光的活菌聚集成微群落,被云雾状的同样呈现绿色荧光的胞外多糖类物质紧密包绕。4例非慢性鼻-鼻窦炎患者中细菌生物膜均为阴性;27例慢性鼻-鼻窦炎患者中细菌生物膜阳性者为16例,占59.26%。细菌生物膜与术前是否应用激素类喷鼻剂或抗生素类药物、是否有鼻窦手术史以及是否伴有过敏性鼻炎或鼻息肉/息肉样变的相关性比较P值最小期望值均为1;术前症状学SNOT-20评分、术前标本侧鼻窦CT评分、病程长短(年)与细菌生物膜评分Pearson相关性分析的P值分别为0.000、0.016和0.011,均<0.05。结论细菌生物膜在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦粘膜中的阳性率为59.26%,其存在与否与术前是否应用激素类喷鼻剂或抗生素类药物、是否有鼻窦手术史以及是否伴有过敏性鼻炎或鼻息肉/息肉样变均无相关性,提示细菌生物膜不受以上因素影响,但是其与术前症状学评分、术前鼻窦CT评分、病程长短具有相关性,术前CT提示鼻窦炎症严重和病程较长、症状较重的患者常呈现细菌生物膜阳性。第二部分鼻窦粘膜细菌生物膜与Treg/Th17细胞功能失平衡目的Treg细胞和Th17细胞对免疫的调节作用是相反的,前者抑制炎症反应避免免疫损伤,后者诱导和放大致炎效应。本实验的目的在于研究慢性鼻-鼻窦炎患者中细菌生物膜阳性者的鼻窦粘膜的局部免疫环境是否存在Treg/Th17细胞功能失平衡。方法收集前述第一部分31例患者标准鼻内镜手术术中取下的鼻窦粘膜,置于液氮中保存,设计Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL—17mRNA三种物质的探针序列,以探针法行RT-PCR检测Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL—17mRNA水平。所得数据以SPSS11.5进行统计学分析:将慢性鼻-鼻窦炎与非慢性鼻-鼻窦炎组、细菌生物膜阳性与阴性组的三种mRNA水平分别进行Student’st检验;将细菌生物膜评分与三种mRNA水平分别进行Spearman相关性分析。结果慢性鼻-鼻窦炎与非慢性鼻-鼻窦炎两组患者的Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL—17 mRNA水平分别进行Student’st检验,相应P值为0.2226、0.6049和0.8155,均)0.05,将细菌生物膜阳性与阴性两组患者的Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL—17 mRNA水平分别进行Student’st检验,相应P值为0.2332、0.1637和0.9569,均>0.05,提示三种mRNA水平在慢性鼻-鼻窦炎与非慢性鼻-鼻窦炎、细菌生物膜阳性与阴性患者鼻窦粘膜中的差别无统计学意义。将细菌生物膜评分与三种mRNA水平分别进行Spearman相关性分析,相应P值为0.156、0.163和0.948,均>0.05,故没有证据显示细菌生物膜与三种mRNA水平具有相关性。结论细菌生物膜与Treg细胞和Th17细胞的功能状态不具有相关性,提示在细菌生物膜阳性的慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦粘膜中并不存在Treg/Th17细胞功能的失平衡,或者可能细菌生物膜的存在与否不受Treg细胞和Th17细胞功能的影响。