【摘 要】
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黑参是将人参进行九蒸九爆后的一种新型加工品,迄今为止,对黑参多糖领域研究尚浅,黑参多糖具有怎样的生物活性鲜有报道。因此本文以黑参为原料探究黑参多糖的提取工艺、分离纯化、含量测定和抗氧化、抗肿瘤的生物活性。通过单因素试验对液料比、提取温度和提取时间进行探究,最后通过响应面优化法得到黑参多糖的最佳提取工艺:液料比为34.6:1,提取温度为70℃,超声时间为56 min。重复提取黑参多糖的工艺,使用优化
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黑参是将人参进行九蒸九爆后的一种新型加工品,迄今为止,对黑参多糖领域研究尚浅,黑参多糖具有怎样的生物活性鲜有报道。因此本文以黑参为原料探究黑参多糖的提取工艺、分离纯化、含量测定和抗氧化、抗肿瘤的生物活性。通过单因素试验对液料比、提取温度和提取时间进行探究,最后通过响应面优化法得到黑参多糖的最佳提取工艺:液料比为34.6:1,提取温度为70℃,超声时间为56 min。重复提取黑参多糖的工艺,使用优化后的工艺条件再次提取黑参多糖。最后黑参多糖实际提取率为9.883%。采用Sevag法除去所提黑参粗多糖中的蛋白杂质,AB-8大孔树脂进行脱色,蒸馏水透析除去小分子杂质,过Sephadex G-200葡聚糖凝胶色谱柱分离出具有单一组分的黑参多糖BGP-1。通过苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法和咔唑法分别测得BGP-1的总糖含量、蛋白质含量和糖醛酸含量为89.21%、0.34%和9.32%。高效液相色谱结果表明:BGP-1在8.9593min处具有单一的吸收峰,代入标准曲线得出分子量约为1.8×10~3k Da。经过PMP-柱前衍生化测单糖组成得出:BGP-1主要是由葡萄糖,阿拉伯糖和甘露糖组成的,算得其摩尔比为70.5:17.3:5.6,同时其中还含有少量的半乳糖和木糖。采用紫外光谱扫描得出:在260和280 nm出没有明显的吸收峰,说明所提取出的黑参多糖已无明显的核酸和蛋白等杂质。采用傅里叶红外光谱和扫描电子显微镜分析得出:BGP-1有多糖的特征吸收峰,是一种含有α-糖苷构型的中性多糖。BGP-1的表面呈丝状结构,相互交织在一起,表明其刚性较强。测试黑参多糖对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离自由基的清除能力和还原力的实验结果验证了黑参多糖具有一定的体外抗氧化活性,且抗氧化能力呈浓度依赖性。采用MTT法测定黑参多糖对MGC-803胃癌细胞的增殖抑制率,在加药浓度为4mg/m L,作用时间为48 h的条件下,黑参多糖能够一直MGC-803细胞的生长增殖。又用流式细胞术和Westen Blot继续印证黑参多糖的抗肿瘤活性,黑参多糖能通过线粒体途径的信号传递来促进细胞凋亡。
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