目的：探讨超临界CO₂萃取技术和分子蒸馏联合应用对中草药有效成分进行提取和分离的可行性。研究超临界CO₂萃取和分子蒸馏最佳操作条件的选择。分析连翘各分离组分的化学成分，并通过药效学实验比较各分离组分的药理作用。 方法： 1．超临界CO₂萃取连翘化学成分的正交试验研究 （1）选定五个因素三个水平：萃取压力（20、25、30MPa）、萃取温度（35、40、45℃）、解析压力（6.3、6.7、7.1MPa）、解析温度（30、40、50℃）、粉碎度（不粉碎、12目、30目），按表L₁₈（3⁷）安排正交试验。 （2）按正交试验设计进行超临界CO₂萃取，确定最佳萃取条件，并对最佳萃取条件进行重复性试验。 （3）考察夹带剂的影响。 （4）超临界CO₂萃取物进行GC-MS分离与鉴定。 2．连翘超临界CO₂萃取物的分子蒸馏 （1）按加热温度100℃、真空度100Pa和加热温度200℃、真空度5Pa进行两次分子蒸馏，得蒸出物1和蒸出物2。 （2）蒸出物1和蒸出物2进行GC-MS分离与鉴定。 3．水溶性成分的提取、分离 （1）连翘超临界CO₂萃取后残渣，每次加30000ml水煮沸3次，合并三次上清液，浓缩至3000ml，高速离心除去沉淀，再用滤纸过滤，得连翘水提液。 （2）将水提液加入预先处理好的大孔树脂上端，先后用水、30％乙醇、50％ 第一军医大学硕士学位论文 乙醇、70％乙醇、90％乙醇各1000ml洗脱，收集洗脱液，各洗脱液均浓缩至 100mla （3）质谱及液－质联用鉴定。 4．药效学试验 ＊解热实验：雄性SD大鼠70只，用水银体温计（口表）测正常体温， 每日2次，连续3日。试验日每小时测体温1次，连续3次，选取体温变动 不高于 0．3OC者 60只随机平均分为 6组。分别用蒸馏水 10ml八g体重、连 翘超临界苹取物16g八g体重、分于蒸馏蒸出物（蒸出物l和蒸出物2合并） 16g八g体重、水提液16g／kg体重、阿斯匹林0．ig八g体重、水提液sg八g 体重灌胃。给药 1小时后，每鼠于背部皮下注射 2，4－h硝基苯酚 0．olsg八g 体重，每20分钟测体温1次，连续测定3小时。 m镇痛实验：取小鼠100只，随机分为5组，每组20只。生理盐水＊ 体重)、盐酸呢替陡注射液（0．059／kg体重）均腹腔给药，连翘超临界革取物、 分子蒸馏蒸出物、水提液均灌胃给药（169八g体重）。给药30分钟后，各鼠 均腹腔注射0．5％醋酸0．2ml／只。观察并记录小鼠是否出现扭体反应（腹部 内凹、伸展后肢、臀部抬高）、出现扭体反应的时间、扭体反应次数，观察 10分钟内各组出现扭体反应小鼠只数，计算各药镇痛百分率。 结果： 1．超临界CO。革取连翘化学成分的正交试验研究 山最佳革取条件为：革取压力30MPa、茬取温度35aC、解析1压力6．7 呷a、解析1温度50C、粉碎度30目。 ①各因素对试验结果的影响大小为：革取温度＞粉碎度＞革取压力＞解 析压力＞解析温度。苹取温度、粉碎度、苯取压力对挥发油得率有极显著性 影响，解析压力对挥发油得率有显著性影响，而解析温度影响较小。 （3） 以乙醇、四氯化碳作为夫带剂的举取效果不如不加失带剂。 N)按最佳革取条件进行的重复性试验收率高于正交试验中的最高收率。 历)质谱图经计算机检索，共鉴定出ZI个成分，主要有：a－菠烯、i－ －3 一 3 中 文摘要菠烯、菠品醇－4、a－酝品醇等。2．连翘超临界CO。革取物的分子蒸馏 （1）蒸出物 1为红色水状液体，约 30ml，按超临界革取物 296克（153ml）计得率为19石％；蒸出物2为红色油状液体，约40ml，得率26．1％。 （2）蒸出物1的质谱图经计算机检索，共鉴定出2个成分，分别为砧品醇叶和a－葩品醇；蒸出物2的质谱图经计算机检索，共鉴定出7个成分，分别为a－菠烯、p－菠烯、菇品醇－4等。3．水溶性成分的提取、分离 （1）初步鉴定出30％乙醇洗脱液中含咖啡酸和芦丁，70％乙醇洗脱液中含咖啡酸，90％乙醇洗脱液中含咖啡酸和熊果酸。 （2）水提液中含咖啡酸和芦丁。4．药效学试验 ＊)解热实验：水提液（16g／kg）有解热效果，且解热作用稍强于阿斯匹林①．ig八g八超临界革取物＊ 小g冶水提液侣八g)有解热效果，且解热作用弱于阿斯匹林（0．1y屿）：分子蒸馏蒸出物（16针咋）无解热效果。 u)镇痛实验：169八g剂量的水提液、超临界CO。苹取物和分子蒸馏蒸出物均有镇痛作用，169八g水提液镇痛效果与 0．059八g盐酸派替陡相似，而超临界CO。?