反复流产是妇产科常见病，约有40%--60%病因不明，目前认为免疫因素尤为重要。近年来的研究表明，母体免疫系统尤其是子宫局部的免疫细胞能否识别并耐受胚胎抗原，直接影响妊娠的建立与维持，母体免疫系统对胚胎的免疫识别受免疫细胞和细胞因子的调节，大量研究表明，正常妊娠过程中母体对胚胎的免疫反应主要以Th2介导的体液免疫为主，Th1介导的细胞免疫往往导致妊娠失败。 协同刺激分子及其受体介导的信号途径在T细胞的激活和行使效应功能中发挥重要作用，正在成为对临床疾病进行免疫干预最有希望的手段之一。CD86与CD28的结合可促进IL-4的产生，使T细胞倾向于发生Th2类炎性反应。研究认为CD28可抑制由CTLA4可引起Th1反应，诱导Th2因子的产生。抗原递呈细胞表面共刺激分子CD80/CD86的表达异常在自然流产的发病中可能起重要作用。T细胞发育过程中的克隆清除的主要方式是T细胞的凋亡，而细胞凋亡主要由Fas/FasL介导。Fas与FasL之间的相互作用在克隆清除、免疫耐受、免疫赦免以及免疫应答过程中均具有重要作用。妊娠期绒毛间隙及胎盘床中表达Fas的母体白细胞被激活，胎儿滋养细胞大量表达FasL，通过Fas/FasL信号诱导活化母体白细胞的凋亡，使胎儿逃避母体的溶细胞毒性，从而保证妊娠的顺利进行。Th1和Th2型细胞对Fas、FasL诱导的细胞凋亡的敏感性不同，表现为Th1型细胞的凋亡迅速，Th2型<WP=96>细胞的凋亡较缓慢。妊娠时母体不排斥胎儿的免疫耐受现象，是否与细胞凋亡有关，这是近年来的研究热点。本研究探讨RSA与Th1、Th2型细胞因子，共刺激分子B7：CD28/CTLA-4系统，Fas/FasL系统的关系，对于探讨RSA的发病机理、纠正其Th1、Th2型细胞因子的失衡状态有重要意义.本实验应用胶原酶、胰酶消化法对人绒毛膜滋养层细胞进行培养，经光镜观察、HE染色、波形蛋白、角蛋白染色，对细胞进行鉴定；通过ELISA法对正常早孕妇女及反复流产妇女外周血、外周血单个核细胞经PHA及自身滋养细胞刺激后，培养上清中IFN-γ、IL-10水平的检测，探讨Th1、Th2型细胞因子与反复流产的关系；免疫组织化学法（S-P）检测绒毛、蜕膜组织Fas、FasL的表达水平、应用RT-PCR方法检测正常早孕、反复流产患者蜕膜组织其CD80、CD86、CD28mRNA的表达，探讨Fas/FasL系统、B7 CD28/CTLA-4 系统与反复流产的关系。本实验成功的对滋养细胞进行分离、培养，经角蛋白染色阳性、波形蛋白染色阴性者占95%以上；反复流产妇女外周血中IFN-γ明显高于正常早孕妇女，IL-10水平明显低于正常早孕组；外周血单个核细胞经PHA刺激，培养24小时和72小时后，正常早孕组培养上清中IL-10水平明显高于反复流产组，而IFN-γ水平明显低于反复流产组；反复流产组IFN-γ水平与IL-10水平之比明显高于正常早孕组；人绒毛膜滋养层细胞与自身外周血单个核细胞混合培养24小时和72小时后，正常早孕组培养上清中IL-10水平明显高于反复流产组，IFN-γ水平明显低于反复流产组；反复流产组IFN-γ水平与IL-10水平之比明显高于正常早孕组；流产组蜕膜组织中表达CD80mRNA，而CD86mRNA未检测到，与正常早孕者相反。流产患者蜕膜组织中CD28mRNA水平低于正常早孕组；正常早孕和反复流产组绒毛滋养细胞均表达Fas、FasL，主要在细胞浆和细胞膜表达，合体滋养细胞Fas表达强于细胞滋养细胞，绒毛间质也有表达，正常早孕组<WP=97>和反复流产组的蜕膜细胞中均有Fas、FasL表达，与正常早孕组相比，流产组绒毛组织中FasL表达下降，差异显著；流产组绒毛组织中Fas表达与正常早孕组相比无显著差异；与正常早孕组相比，流产组蜕膜组织中FasL表达下降，Fas表达增强，差异显著。本研究的意义在于应用酶消化法成功的对正常早孕人绒毛膜滋养层细胞进行培养，简化了实验步骤，短期内获得了大量高纯度的细胞滋养细胞，为实验奠定了基础。正常早孕妇女以Th2免疫为主，反复流产患者以Th1免疫为主，反复流产患者与正常早孕妇女比较，Th1/Th2比例失衡。正常早孕妇女蜕膜组织中有低水平的CD86mRNA表达，而未检测出CD80mRNA，反复流产妇女则相反，反复流产妇女蜕膜组织中CD28的表达下降，CD80/CD86、CD28的表达异常在自然流产的发病中起重要作用，CD80/CD86、CD28可能参与妊娠期间与Th1、Th2型细胞因子的调节，表达异常与流产密切相关。原因不明反复流产患者Fas/FasL系统表达异常，Fas/FasL系统对T细胞的凋亡、免疫耐受的的诱导有重要意义，其表达异常影响着Th1、Th2型细胞因子的表达，与反复流产的发生关系密切。综上，Th1、Th2细胞因子与反复流产关系密切，两型因子间的平衡受Fas/FasL系统、B7 CD28/CTLA-4 系统的调控。本文为人们能否通过利用两种调节机制加入Th2型细胞因子或抗Th1型细胞因子纠正RSA患者的免疫失衡状态，并用于早期诊断及判断治疗效果和预后，提供理论依据。