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目的:甲型血友病是由于凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,F8)的遗传性缺陷或缺乏,以致凝血活酶生成障碍的出血性疾病。这是一种常见的X连锁隐性遗传性疾病,该病主要是女性传递,男性发病,多见隔代遗传。甲型血友病主要是由于基因突变所致,而22内含子倒位是F8基因上最为集中的一种突变,约占重型甲型血友病的40%-50%,所以FⅧ基因内含子22的倒位分析可作为重型甲型血友病的首选试验,也是目前用于临床诊断的直接基因检测方法。甲型血友病胎儿凝血因子Ⅷ合成障碍,胎儿脐带血凝血因子Ⅷ明显低于正常,对高危胎儿进行脐血因子Ⅷ检测进行产前诊断的可靠性尚需进一步评价。本实验主要是探讨应用胎儿脐静脉血FⅧ:C检测结合基因诊断对甲型血友病高危胎儿进行产前诊断的临床可行性。研究方法:1研究对象选取自1996年10月到2008年10月在山东省立医院行产前诊断的79例孕20-35周间的甲型血友病高危孕妇为研究对象2实验方法2.1样本采集对于79例20-35周间的甲型血友病高危孕妇,行B超检查核实胎龄并确定胎儿为男婴,经腹B超引导下行胎儿脐静脉穿刺取血术。取胎儿脐静脉血3 mL,离心后血浆送山东省血液中心,高危孕妇外周血5 mL加入相应剂量EDTA抗凝,离心后血浆同时送检。离心后的胎儿及孕妇血细胞-20℃短期冻存备用。2.2实验方法分别应用一期法和ELISA法测定FⅧ:C及vWF:Ag,对于近1年来FⅧ:C＜10%的胎儿血(n=6)采用LD-PCR检测内含子22倒位,对于倒位阳性的胎儿母亲应用LD-PCR检测倒位携带者;对于非倒位胎儿及其母亲应用直接基因测序方法检测基因突变位点。结果:79例孕妇血FⅧ:C%为52-139%,平均(99.60±28.10)%。胎儿血FⅧ:C%＜10%者23例,平均(2.64±1.92)%,均引产;其中8例胎儿血FⅧ:C＜1%(重型血友病胎儿),15例胎儿血FⅧ:C＞1%(轻中型血友病胎儿)。胎儿血FⅧ:C 10%-30%者12例,平均(19.78±6.71)%,5例引产,7例继续妊娠。有44例FⅧ:C＞30%,平均(58.60±12.12)%,继续妊娠,所有51例未引产者生后随访至今尚未发现异常。所有孕妇及胎儿血vWF均在正常范围内。行基因诊断的6例胎儿血FⅧ:C＜10%,3例FⅧ:C＞1%,3例FⅧ:C＜1%。我们送检混有少量羊水的2ml脐带血及没有混有羊水的2ml脐带血检测FⅧ:C,结果显示在脐带血穿刺术操作过程中混入极少量羊水对结果无影响。结论:应用胎儿血FⅧ:C及vWF:Ag浓度测定可以对甲型血友病高危孕妇进行产前诊断,结合LD-PCR技术可准确的对甲型血友病内含子22倒位者进行产前诊断及携带者的诊断,但基因测序检测突变位点仍需要进一步开展实验研究。意义:胎儿血FⅧ:C检测进行产前诊断可以防止甲型血友病患儿的出生,FⅧ基因突变的检测可以进一步确定FⅧ:C血清学检查的准确性,诊断出携带者,对于甲型血友病家系的遗传咨询、产前诊断,减少不必要的侵入性产前诊断,减轻血友病家庭的经济和心理负担,具有重要的应用价值和社会效益。