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背景三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）约占全部乳腺癌总数的15.0%～20.0%,与非三阴性乳腺癌（non-triple-negative breast cancer,N-TNBC）的临床特性不同,TNBC的发病更趋低龄[1],侵袭性更强,易发生肝、脑转移。截至目前,针对TNBC的治疗仍是有限的,且往往因耐药出现复发、转移[2],出现转移的TNBC患者的中位生存期仅为1年,远低于N-TNBC患者[3]。扭曲蛋白（Twist）是上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）过程的重要驱动因子[4],波形蛋白（Vimentin）是EMT进程中的标志性蛋白。EMT过程中上皮细胞之间的紧密联系减弱、正常排列紊乱、基底膜降解、胞外基质重新架构,细胞网架体系、形态及移动能力发生改变,使肿瘤细胞易于迁移并定植侵袭身体其他器官。血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）通过肿瘤细胞自身变形和细胞外基质重塑构成血管样结构,覆盖VM通道的肿瘤细胞表达一些内皮细胞标记物[5],提示VM过程类似于EMT涉及从上皮特征到内皮表型的转变。本文通过检测Twist、Vimentin、VM在TNBC中的表达情况,分析三者表达与TNBC临床病理特征的关系,并且分析Twist、Vimentin、VM的相关性及与预后关系,初步探讨在TNBC中EMT与VM之间的关系,旨为TNBC治疗寻找新靶点及预后预测因子奠定基础。目的通过检测在TNBC和同期乳腺良性疾病组织中Twist、Vimentin、VM三者的表达情况,分析Twist、Vimentin、VM与TNBC患者临床病理特征的关系以及三者表达的相关性,初步探讨Twist、Vimentin、VM的表达之间存在的调控关系。通过对TNBC患者进行预后随访分析Twist、Vimentin、VM的表达情况与TNBC患者预后关系,以期为TNBC治疗寻求新的有效靶点及预后预测因子奠定基础。方法1.整理收集临床信息完整的120例TNBC以及同期30例乳腺良性疾病组织,采用免疫组织化学染色（immunohistochemical,IHC）的方法检测组织中的Twist、Vimentin的表达水平,采用血小板-内皮细胞粘附分子（platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31）及过碘酸-希夫液（periodic acid-schiff stain,PAS）双染法检测组织中VM是否表达。比较Twist、Vimentin、VM在不同病理特征患者中的阳性表达率。采用Spearman秩相关分析分析Twist、Vimentin、VM表达的相关性。2.对120例TNBC患者进行临床随访,采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验对随访数据进行分析,分析Twist、Vimentin、VM的表达与患者的预后关系。所有统计数据分析应用SPSS 22.0软件进行统计,统计结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.TNBC及乳腺良性疾病组织中Twist、Vimentin及VM的表达情况TNBC组织中,Twist的表达以胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞,Vimentin的表达以胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。VM以切片染色中出现樱桃红色管道,内壁无血管内皮细胞衬附,管道中有红细胞为阳性表达,否则为阴性表达。1.1 TNBC及乳腺良性疾病组织中Twist的表达情况120例TNBC及30例乳腺良性疾病石蜡组织切片行免疫组织化学染色,显微镜下观察Twist的表达。在120例TNBC组织中,阳性73例,阳性表达率为60.8%（73/120）。在30例乳腺良性疾病组织中,阳性4例,阳性表达率为13.3%（4/30）。存在统计学差异（χ2=21.675,P<0.05）。1.2 TNBC及乳腺良性疾病组织中Vimentin的表达情况120例TNBC及30例乳腺良性疾病石蜡组织切片进行免疫组织化学染色,显微镜下观察Vimentin的表达情况,在120例TNBC组织中,阳性30例,阳性表达率为25.0%（30/120）。在30例乳腺良性疾病组织中,阳性2例,阳性表达率为6.7%（2/30）。差异有统计学差异（χ2=4.807,P<0.05）。1.3 TNBC及乳腺良性疾病组织标本中VM的表达情况120例TNBC及30例乳腺良性疾病石蜡组织切片行CD31及PAS双重染色法检测VM表达,在120例TNBC组织VM的阳性表达34例,阳性率为28.3%（34/120）;30例乳腺良性疾病组织中未检测到VM的表达,有统计学差异（χ2=10.991,P<0.05）。2.Twist、Vimentin及VM的表达与TNBC临床病理特征的关系TNBC组织中Twist的表达与患者的淋巴结转移、临床分期相关（χ2=13.996、11.970,P<0.05）,与患者肿块大小、年龄及月经状态无关（χ2=1.872、0.001、0.102,P>0.05）;Vimentin的表达与肿块大小、淋巴结转移、临床分期相关（χ2=8.990、3.964、17.778,P<0.05）,与患者年龄大小及是否绝经无关（χ2=0.348、2.200,P>0.05）;VM是否表达与患者肿块大小、淋巴结转移、临床分期相关（χ2=10.614、4.986、6.936,P<0.05）,而与患者年龄及是否绝经无关（χ2=2.310、3.066,P>0.05）。3.TNBC中Twist、Vimentin及VM表达的相关性在TNBC中Twist、Vimentin表达与VM现象的出现呈显著的正相关（r=0.277、0.363,P<0.05）,Twist、Vimentin二者的表达也呈显著的相关性（r=0.384,P<0.05）。4.TNBC中Twist、Vimentin及VM表达与患者预后关系120例TNBC患者随访9～83个月,平均随访时间55个月,共有35名患者在随访过程中出现死亡,生存率为70.8%（85/120）,Twist阳性表达者生存率为61.6%（45/73）,Twist表达阴性者生存率为85.1%（40/47）,二者存在显著差异,P<0.05;Vimentin表达阳性的患者生存率为43.3%（13/30）,阴性表达患者生存率为80%（72/90）,两组差异显著,P<0.05;VM表达阳性的患者生存率为55.88%（19/34）,阴性表达患者生存率为76.7%（66/86）,两组差异显著,P<0.05;Twist、Vimentin及VM均表达阳性患者生存率为29.4%（5/17）,显著低于三者不全为阳性组的生存率77.7%（80/103）。Log-rank单因素生存分析表明Twist、Vimentin、VM的表达与TNBC患者生存期显著相关（χ2=9.490、22.940、10.820,P<0.05）。结论1.Twist、Vimentin、VM在TNBC组织较乳腺良性疾病组织高表达。2.在TNBC组织学检测发现,Twist表达阳性与TNBC淋巴结是否转移以及临床分期显著相关;肿块直径、淋巴结转移及临床分期与Vimentin的表达相关;肿块直径、淋巴结转移、临床分期与是否有VM现象相关。3.Twist、Vimentin、VM在TNBC组织中的表达呈显著正相关,提示Twist、Vimentin参与TNBC VM的形成。4.生存分析结果提示,在TNBC中Twist、Vimentin、VM表达阳性提示患者不良预后,Twist、Vimentin、VM是TNBC的潜在生存预测因子。