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目的:钼是动植物机体正常生理活动中不可或缺的微量元素。伴随钼业迅速发展带来的是钼污染致大量经济动物和人类的健康问题,而生殖健康关乎动物生长和传代则受到了更多科研工作者的重视。为了深入研究钼对雄性小鼠的生殖系统的损伤机制,本试验通过研究钼对小鼠精子质量、睾丸组织结构、睾丸氧化损伤、性腺轴激素分泌及睾丸组织PI3K/AKT 信号通路的影响为钼中毒致生殖疾病的防治提供理论依据。
方法:试验选取4周龄清洁级雄性健康昆明系小鼠60只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,分别在饮水中添加0、100、200、400 mg/L的钼,基础日粮相同,自由饮水,试验周期90 d。利用HE染色法和透射电镜观察睾丸组织结构;试剂盒检测睾丸组织SOD、T-AOC、MDA、LDH活性或含量;间接ELISA法检测血清中GnRH、FSH、LH、T含量;RT-PCR和Western-blot检测PI3K/AKT信号通路PI3K、PTEN、AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax和Bad的mRNA和蛋白的表达情况。
结果:1.随着钼剂量增加,精子活率和密度均下降,精子畸形率上升。
2.睾丸组织内细胞结构损伤严重:曲精小管管间隙增大,各级生精细胞间隙增大,大量细胞在管腔内死亡游离,亚细胞器表现为线粒体空泡化、内质网扩张和核固缩。
3.睾丸组织氧化损伤结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组SOD和T-AOC活性极显著下降(P<0.01),Ⅱ组LDH活性显著下降(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ组LDH活性极显著上升(P<0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组MDA含量极显著升高(P<0.01)。
4.各组小鼠性腺轴激素分泌结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组GnRH和FSH分泌量维持不变,LH和T分泌显著增多(P<0.05);Ⅲ和Ⅳ组中各激素均开始显著下降(P<0.05)。
5.睾丸组织PI3K/AKT信号通路上目的基因RT-PCR结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组PI3K、AKT、Bcl-2、Bad和Bax的mRNA表达量显著升高(P<0.05),Ⅱ组PTEN、Caspase-9 的 mRNA表达量显著下降(P<0.05),Ⅲ组 Caspase-9的mRNA 表达量显著升高(P<0.05);Ⅳ组 PI3K、AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bad和Bax的mRNA表达量显著下降(P<0.05),PTEN的mRNA表达量显著升高(P<0.05)。相应目的蛋白WB结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组PI3K、AKT、P-AKT、Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白表达量显著升高(P<0.05),Ⅱ组PTEN蛋白表达量显著下降(P<0.05);Ⅳ组PI3K、PTEN、AKT 和Bax蛋白表达量显著升高(P<0.05),Bcl-2和Bad蛋白表达量显著下降(P<0.05)。
结论:本试验发现一定剂量钼能造成小鼠脏器系数下降、精子质量下降、睾丸组织细胞病理损伤、睾丸组织氧化损伤、性腺轴激素分泌紊乱并通过影响PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达量对雄性小鼠生殖系统造成损伤。
方法:试验选取4周龄清洁级雄性健康昆明系小鼠60只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,分别在饮水中添加0、100、200、400 mg/L的钼,基础日粮相同,自由饮水,试验周期90 d。利用HE染色法和透射电镜观察睾丸组织结构;试剂盒检测睾丸组织SOD、T-AOC、MDA、LDH活性或含量;间接ELISA法检测血清中GnRH、FSH、LH、T含量;RT-PCR和Western-blot检测PI3K/AKT信号通路PI3K、PTEN、AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax和Bad的mRNA和蛋白的表达情况。
结果:1.随着钼剂量增加,精子活率和密度均下降,精子畸形率上升。
2.睾丸组织内细胞结构损伤严重:曲精小管管间隙增大,各级生精细胞间隙增大,大量细胞在管腔内死亡游离,亚细胞器表现为线粒体空泡化、内质网扩张和核固缩。
3.睾丸组织氧化损伤结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组SOD和T-AOC活性极显著下降(P<0.01),Ⅱ组LDH活性显著下降(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ组LDH活性极显著上升(P<0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组MDA含量极显著升高(P<0.01)。
4.各组小鼠性腺轴激素分泌结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组GnRH和FSH分泌量维持不变,LH和T分泌显著增多(P<0.05);Ⅲ和Ⅳ组中各激素均开始显著下降(P<0.05)。
5.睾丸组织PI3K/AKT信号通路上目的基因RT-PCR结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组PI3K、AKT、Bcl-2、Bad和Bax的mRNA表达量显著升高(P<0.05),Ⅱ组PTEN、Caspase-9 的 mRNA表达量显著下降(P<0.05),Ⅲ组 Caspase-9的mRNA 表达量显著升高(P<0.05);Ⅳ组 PI3K、AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bad和Bax的mRNA表达量显著下降(P<0.05),PTEN的mRNA表达量显著升高(P<0.05)。相应目的蛋白WB结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组PI3K、AKT、P-AKT、Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白表达量显著升高(P<0.05),Ⅱ组PTEN蛋白表达量显著下降(P<0.05);Ⅳ组PI3K、PTEN、AKT 和Bax蛋白表达量显著升高(P<0.05),Bcl-2和Bad蛋白表达量显著下降(P<0.05)。
结论:本试验发现一定剂量钼能造成小鼠脏器系数下降、精子质量下降、睾丸组织细胞病理损伤、睾丸组织氧化损伤、性腺轴激素分泌紊乱并通过影响PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达量对雄性小鼠生殖系统造成损伤。