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Bt-Cry蛋白是一种十分普遍的抗虫转基因蛋白,其中Cry1Ac蛋白是一种典型的并且被广泛研究的Bt蛋白。Bt蛋白不仅存在于很多抗虫转基因作物中,如玉米、土豆、棉花和水稻等,而且产量也在逐年增加。由转基因作物引起的生态风险、环境问题日益受到全球关注,转基因食品的安全性和可靠性都令人担忧,因此,对产品中转基因成分的监测非常重要。Bt蛋白检测技术中以ELISA为主,其中最常用到的抗体为传统单克隆抗体和多克隆抗体,也有部分应用到单链抗体和纳米抗体等基因工程抗体。传统抗体特异性强,灵敏度高,而基因工程抗体尤其是纳米抗体,分子量小,稳定性高,易于表达和改造。本文以Cry1Ac蛋白为靶抗原,采用传统单克隆抗体制备技术和噬菌体展示技术分别制备抗Cry1Ac单克隆抗体和纳米抗体,并将其用于免疫学分析,实验结果如下:1 Cry1Ac鼠单克隆抗体的制备及其在免疫学分析中的应用采用杂交瘤细胞筛选技术,将Cry1Ac蛋白免疫小鼠,取小鼠脾脏B细胞与骨髓瘤细胞融合,经3~5次亚克隆和非竞争间接ELISA鉴定,最终筛选出8株抗Cry1Ac单克隆抗体;抗体叠加ELISA初步分析单克隆抗体3A5和9F10能识别不同的抗原表位;以单克隆抗体8A8为捕获抗体,酶标抗体9F10-HRP为检测抗体,建立双抗夹心ELISA,线性范围0.98~30ng/m L,最低检测限0.1ng/mL。2 Cry1Ac纳米抗体的研制及其免疫学分析采用噬菌体展示技术,以Cry1Ac蛋白为靶分子,从驼源天然纳米抗体库中淘选出3种具有不同序列的能特异性结合Cry1Ac的噬菌体,然后提取噬菌体DNA,构建pET25b表达载体并转化至E.coli Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达、Ni柱纯化获得了3种抗Cry1Ac纳米抗体。最后采用双抗夹心ELISA分析8种单克隆抗体与3种特异性噬菌体、3种特异性噬菌体与3种纳米抗体以及3种纳米抗体与8种单克隆抗体之间的匹配效果,并以最佳配对组合建立双抗夹心ELISA标准曲线,线性范围分别为0.1~3.1ng/mL、0.1~6.25ng/m L和3.9~125ng/m L,最低检测限分别为0.02ng/mL、0.08ng/mL以及2.1ng/m L。