芋螺利用分泌于其毒管内的毒液来麻痹猎物和防御攻击,这些毒液主要由小分子多肽芋螺毒素（Conotoxin,conopeptide,简称CTX）组成,它们化学结构稳定、生物活性强、作用靶位选择性高,已逐渐成为神经科学研究中开发工具药和药物先导物的重要来源。目前,全球已报道超过830种芋螺,每种芋螺毒液中含有约3,000种不同的芋螺毒素,因此芋螺中存在超过150万种不同的活性毒素肽,然而目前已发现的芋螺多肽不到其总量的1%。此外,芋螺还可以分泌多种蛋白酶抑制剂类毒素,以抑制猎物体内蛋白酶的活性,从而使芋螺毒素更好地发挥作用,但关于芋螺中蛋白酶抑制剂类的毒素鲜有报道。因此,还有很多的芋螺毒素资源有待开发和利用。针对以上问题,本课题从以下两个方面对海南产芋螺毒素资源进行了研究:一、采用三种方法从信号芋螺（Conus litteratus）和大理石芋螺（Conus marmoreus）中共获得了108条毒素基因序列:89条A-超家族、15条O-超家族、1条T-超家族和3条J-超家族毒素基因序列。在C.litteratus中,共发现了72条:（1）根据A-超家族和O-超家族各自保守的内含子末端和3’-端非翻译区（3’-UTR）设计引物,克隆到46条A-超家族芋螺毒素基因序列,其中1条3C毒素基因（序列中编码三个半胱氨酸,Cysteine,Cys）;11条O-超家族芋螺毒素,其中9条VI/VII基因,2条5C基因（序列中编码五个Cys）;（2）根据A-超家族信号肽和3’-UTR保守区域设计引物,克隆到4条包含信号肽编码区的A-超家族芋螺毒素基因序列;（3）利用3’-RACE技术获得c DNA,从中克隆得到了3条A-超家族、4条O-超家族、1条T-超家族和3条J-超家族毒素基因序列。在C.marmoreus中,根据A-超家族保守的内含子末端和3’-UTR设计引物,共克隆得到了36条A-超家族芋螺毒素基因序列。二、采用两种方法从3种芋螺中共获得了13条kunitz型毒素序列:（1）根据本实验室从C.litteratus中新发现的098和069x kunitz型毒素序列设计引物,以3种芋螺的DNA为模板,克隆到11条包含内含子的kunitz型毒素序列,其中,从C.litteratus中克隆到2条098和2条069x kunitz型毒素序列,从C.marmoreus和帝王芋螺（C.imperialis）中分别克隆到4条和3条098 kunitz型毒素序列;（2）利用3’-RACE获得C.litteratus的c DNA,从中成功克隆到2条不含内含子的069x kunitz型毒素序列。新基因的发现为芋螺毒素的人工合成、活性鉴定以及海洋药用资源的开发利用提供了基础。对芋螺中kunitz型毒素的进化树分析可知,新发现的kunitz型毒素是一类比较新颖毒素。此外,本研究首次从芋螺基因组中获得了编码kunitz型毒素基因的内含子序列并对其进行了分析,结果表明,内含子中微卫星DNA的重复可能影响着kunitz型毒素的表达,以上结果为芋螺中kunitz型毒素的深入研究奠定了基础。