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马流产沙门菌病是由马流产沙门菌(Salmonella abortus equi, S. abortus equi)引起马属动物流产为主的传染病,可对现代马养殖业产生严重的危害。FliC和FljB是该菌的主要鞭毛蛋白,参与该菌的运动、粘附、侵袭和生物被膜的形成密切相关。本研究表达了重组鞭毛蛋白FliC和FljB,以小鼠和马为研究模型,比较分析了该两种蛋白在免疫学和生物学特性方面的特点与差异。
本研究表达纯化了该菌的鞭毛蛋白FliC和FljB,以及实验室前期构建的分选酶(Sortase, SrtA)和三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)蛋白,经SDS-PAGE分析大小分别为52kDa、42kDa、27kDa和30kDa,将纯化后的四种蛋白单独和联合免疫小鼠,采用间接ELISA法,对免疫后的抗体水平、效价及分型进行检测,结果表明,FljB+SrtA免疫组抗体水平显著高于其他免疫组(P<0.05),抗体效价可达(1: 218 700),产生的抗体亚型以IgG1和IgG2b为主。
对免疫小鼠进行保护性检测结果表明,FljB+SrtA免疫组的小鼠存活率最高为86.7%,FljB和FliC+SrtA免疫组的80%,GAPDH免疫组存活率最低为53.3%。各免疫组小鼠体重变化在攻击后第4d体重开始逐渐恢复。对不同脏器组织荷菌量检测结果表明,FliC+SrtA、FljB+SrtA、FliC+GAPDH和FljB+GAPDH免疫组肝脏、脾脏、肺脏和肾脏的荷菌量均显著低于单独免疫组(P<0.05),FljB+SrtA和FljB+GAPDH免疫组小鼠肝脏和脾脏的荷菌量显著低于其他免疫组(P<0.05)。
各实验组对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的检测结果显示,FljB+SrtA组淋巴细胞刺激指数最高为1.826,显著高于其他各实验组(P<0.05),各组增殖指数与浓度呈正相关。各实验组蛋白对马中性粒细胞(polymorphonuclear leukocytes, PMN)的吞噬抑制结果显示,FljB各联合免疫组的吞噬抑制作用显著高于FliC各组,且抑制吞噬作用与蛋白剂量呈正相关;各组抗血清对马PMN的调理吞噬结果显示,FljB+SrtA与FljB+GAPDH抗血清的调理吞噬作用显著强于其它组。
各免疫组在攻击后,FljB+SrtA免疫组诱导小鼠产生的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17A和IFN-γ的表达水平显著高于FliC+SrtA及其它单独免疫组(P<0.05),其中IL-10的表达水平最高;FljB+GAPDH免疫组诱导小鼠产生的IL-2、IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ的水平显著高于FliC各联合免疫组(P<0.05)。
将纯化后的FliC、FljB分别与SrtA和GAPDH免疫马匹,对免疫后马匹的抗体水平、效价及分型进行检测结果表明,FljB+SrtA免疫组抗体水平显著高于其他各单独和联合免疫组(P<0.05),其抗体效价可达(1: 72 900)。分析各免疫组马匹免疫相关因子表达情况结果显示,FljB+SrtA组的各免疫相关因子的诱导水平均高于其它免疫组,其中IL-10的诱导水平最高,各免疫组IFN-γ诱导水平差异不明显。
S.abortusequi的FliC和FljB单独或与其它蛋白联合免疫,对小鼠和马匹均能诱导产生良好的体液和细胞免疫免疫效果,对小鼠的致死性感染起到良好的保护作用,且以FljB蛋白对SrtA及GAPDH的免疫增强作用优于FliC,本研究的结果为深入了解鞭毛蛋白的免疫特性,进一步利用其进行相关传染病的防控提供一定的实验基础。
本研究表达纯化了该菌的鞭毛蛋白FliC和FljB,以及实验室前期构建的分选酶(Sortase, SrtA)和三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)蛋白,经SDS-PAGE分析大小分别为52kDa、42kDa、27kDa和30kDa,将纯化后的四种蛋白单独和联合免疫小鼠,采用间接ELISA法,对免疫后的抗体水平、效价及分型进行检测,结果表明,FljB+SrtA免疫组抗体水平显著高于其他免疫组(P<0.05),抗体效价可达(1: 218 700),产生的抗体亚型以IgG1和IgG2b为主。
对免疫小鼠进行保护性检测结果表明,FljB+SrtA免疫组的小鼠存活率最高为86.7%,FljB和FliC+SrtA免疫组的80%,GAPDH免疫组存活率最低为53.3%。各免疫组小鼠体重变化在攻击后第4d体重开始逐渐恢复。对不同脏器组织荷菌量检测结果表明,FliC+SrtA、FljB+SrtA、FliC+GAPDH和FljB+GAPDH免疫组肝脏、脾脏、肺脏和肾脏的荷菌量均显著低于单独免疫组(P<0.05),FljB+SrtA和FljB+GAPDH免疫组小鼠肝脏和脾脏的荷菌量显著低于其他免疫组(P<0.05)。
各实验组对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的检测结果显示,FljB+SrtA组淋巴细胞刺激指数最高为1.826,显著高于其他各实验组(P<0.05),各组增殖指数与浓度呈正相关。各实验组蛋白对马中性粒细胞(polymorphonuclear leukocytes, PMN)的吞噬抑制结果显示,FljB各联合免疫组的吞噬抑制作用显著高于FliC各组,且抑制吞噬作用与蛋白剂量呈正相关;各组抗血清对马PMN的调理吞噬结果显示,FljB+SrtA与FljB+GAPDH抗血清的调理吞噬作用显著强于其它组。
各免疫组在攻击后,FljB+SrtA免疫组诱导小鼠产生的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17A和IFN-γ的表达水平显著高于FliC+SrtA及其它单独免疫组(P<0.05),其中IL-10的表达水平最高;FljB+GAPDH免疫组诱导小鼠产生的IL-2、IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ的水平显著高于FliC各联合免疫组(P<0.05)。
将纯化后的FliC、FljB分别与SrtA和GAPDH免疫马匹,对免疫后马匹的抗体水平、效价及分型进行检测结果表明,FljB+SrtA免疫组抗体水平显著高于其他各单独和联合免疫组(P<0.05),其抗体效价可达(1: 72 900)。分析各免疫组马匹免疫相关因子表达情况结果显示,FljB+SrtA组的各免疫相关因子的诱导水平均高于其它免疫组,其中IL-10的诱导水平最高,各免疫组IFN-γ诱导水平差异不明显。
S.abortusequi的FliC和FljB单独或与其它蛋白联合免疫,对小鼠和马匹均能诱导产生良好的体液和细胞免疫免疫效果,对小鼠的致死性感染起到良好的保护作用,且以FljB蛋白对SrtA及GAPDH的免疫增强作用优于FliC,本研究的结果为深入了解鞭毛蛋白的免疫特性,进一步利用其进行相关传染病的防控提供一定的实验基础。