ETV5在人脐带间充质干细胞的生物学功能研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Anody12341234
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目的:  干细胞是一种能够高度自我增殖、未充分分化不成熟的、具有再生为各种组织器官的细胞,医学界称为“万用细胞”,随着医学研究不断深入,干细胞移植治疗已经成为解决许多疑难杂症的首要治疗方式。人脐带间充质干细胞作为脐带来源的成体干细胞,具有来源方便、增殖迅速、存活时间长、不受伦理与道德约束等特点,是细胞替代治疗的理想来源。我们前期实验研究了人脐带间充质干细胞向生殖细胞、心肌细胞、神经细胞、癌细胞等细胞方向的诱导分化,但是对人脐带间充质干细胞(HUMSCs)本身的分子调节机制暂未有具体的研究。ETV5作为ETS家族转录因子的一员,文献报道ETV5在精原干细胞中能够调控BCL6b、Lhx1、CXCR4的表达及癌细胞中调控FOXM1的表达而参与细胞增殖、细胞自我更新、肿瘤形成等过程,所以本实验旨在前期研究的基础上,通过电转染方式将ETV5 siRNA转染HUMSCs,研究并探讨ETV5在HUMSCs的生物学功能及其可能的调控机制。  方法:  通过小块组织贴壁法培养、扩增HUMSCs,取第三代的HUMSCs,消化、计数后通过电转染方式以每孔4×105细胞加3uM浓度的ETV5干扰RNA(siRNA)将其转染HUMSCs并接种到6孔板中,电转染了ETV5 siRNA的HUMSCs为实验组,仅单纯电处理的 HUMSCs为对照组,培养箱培养48h后显微镜下观察细胞生长融合度、消化计数并提取RNA,采用qRT-PCR检测HUMSCs的ETV5 mRNA表达情况;qRT-PCR检测BCL6b、Lhx1、CXCR4、FOXM1 mRNA的表达情况。  结果:  显微镜下观察电转染了ETV5 siRNA的HUMSCs培养48h后细胞生长融合度约65%-70%,细胞计数平均约8×105,对照组显微镜下观察细胞生长融合度约80%-85%,细胞计数平均约10.5×105,差异具有统计学意义(p<0.05);qRT-PCR结果显示电转染了ETV5 siRNA的HUMSCs培养48h后ETV5 mRNA表达水平较对照组下降,差异具有统计学意义(p<0.05);同时电转了ETV5 siRNA的HUMSCs较对照组BCL6b、FOXM1 mRNA表达水平下降,而CXCR4、Lhx1 mRNA表达水平升高,差异均具有统计学意义(p<0.05)。  结论:  ⑴HUMSCs通过电转染ETV5 siRNA干扰ETV5表达,能抑制细胞增殖,说明ETV5在HUMSCs中能促进细胞增殖。⑵在HUMSCs中,随着ETV5 mRNA表达下降,BCL6b、FOXM1 mRNA表达水平也下降,而CXCR4、Lhx1 mRNA表达水平升高。⑶在HUMSCs中,ETV5可能通过上调BCL6b、FOXM1表达而促细胞增殖,而通过负性调控CXCR4、Lhx1的表达参与细胞的增殖、自我更新和细胞迁移。
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