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兜兰(Paphiopedilum),由于其生境的破坏和人们的过度采挖,加之本身繁殖的困难,已成为世界上最濒危的植物物种之一。魔帝类兜兰(P.Maudiae type)为杂交种,栽培管理相对容易,具有极大的市场价值,目前主要通过无菌播种繁殖,不能保证母株的优良特征,对其进行无性克隆繁殖十分必要。但兜兰的组织培养难度较大,还没有利用无性克隆进行规模化生产的报道。本文对魔帝类兜兰的组织培养进行研究,以期能为大量繁殖魔帝类兜兰和加强兜兰原生种的保护提供基础。本文以魔帝类兜兰无菌播种得到的材料为外植体,研究了不同外植体的组织培养和组培苗的移栽,得到如下结果:1.兜兰原球茎培养:原球茎的薄层培养,较适合的切片方式是纵切,切片在1/2MS+1.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA的培养基中可形成丛生芽。原球茎的增殖培养中不经过愈伤阶段,直接发育为芽,通过丛生芽方式增殖。原球茎初代培养中芽诱导数较多的是1/2 MS+1.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA。继代培养中1/2 MS+5 mg/L KT处理下丛生芽增殖较多。长时间的黑暗培养原球茎芽诱导率低。液体悬浮培养时,兜兰原球茎仅发生形态上的变化,并没有增殖。2.兜兰幼苗增殖培养:幼苗的多代培养也证实了丛生芽是兜兰快繁的主要形式,1/2 MS+0.5 mg/L TDZ在初代培养中能较好的促进幼苗的增殖。随后的继代培养中1/2MS+5 mg/L BA促进幼苗增殖的效果显著。结合多代后丛生芽的培养可知,1/2 MS+5mg/L BA+0.5 mg/L NAA的能使幼苗产生更多的丛生芽。兜兰叶片培养中,叶片变褐后死亡,故不适合作为外植体进行组织培养。3.兜兰的壮苗生根培养:经三个月的培养,统计株高、叶片数和根数发现:与对照相比,20 g/L的蔗糖处理能显著增加幼苗的高度和根数。1 g/L H1+1 g/L H2基本培养基中幼苗的株高最高,叶片展开数较多。4.兜兰组培苗的移栽:椰壳单独或混合使用都不利于组培苗的生长,单独使用树皮可使成活率达到最高为92.5%,可用作兜兰组培苗的移栽基质。但树皮保水性能差,单独使用时需勤浇水,且容重过小,不利于大苗的移栽管理。在大苗栽培中可加入植金石,植金石∶树皮=2∶1(v∶v)的比例有利于提高兜兰的移栽成活率。