为了明确玉米大斑病菌Fus3/Kss1-homolog途径在病菌生长发育及致病过程中的调控作用,本研究通过候选基因法和Genome-walking技术克隆得到了玉米大斑病菌MAPK级联途径Fus3/Kss1通路下游的一个基因StSTE12;利用生物信息学方法对该基因进行保守结构域和进化树分析,发现它与其它植物病原真菌的Ste12-like蛋白聚为同一类,具有这类转录因子特有的保守结构域;利用β-半乳糖苷酶法检测发现,StSte12具有转录自激活活性;通过酵母双杂交技术初步证明StSte12受StStk2的调控;通过酵母异源互补和RNA干扰(RNA interference,RNAi)两种方法分别创制酵母异源互补转化子和RNAi沉默转化子,并通过对酵母功能互补转化子和RNAi转化子进行分析,明确了该基因主要参与了病菌的附着胞发育及侵染过程,本试验的主要研究结果如下:1.利用候选基因法及Genome-walking技术得到了玉米大斑病菌StSTK2基因下游的转录因子StSTE12,该基因DNA全长为2816 bp,cDNA为2085 bp,编码694个氨基酸,包含5个外显子和4个内含子;通过蛋白比对发现,StSte12具有转录因子特有的STE homeodomain和ZnF_C2H2锌指结构;同源性分析显示,该基因与其它植物病原真菌的STE12-like基因有较高的同源性。2.利用β-半乳糖苷酶法检测发现,StSte12能够激活下游基因LACZ的表达,经X-α-Gal染色后显示蓝色,说明StSte12具有转录自激活活性;通过酵母双杂交技术发现,StSte12受StStk2的调控,对于它们之间究竟如何作用还需进一步的研究。3.将StSTE12基因转化至酿酒酵母ScSTE12基因的缺失突变体中,筛选酿酒酵母ScSTE12基因的功能互补突变体并对其进行分析,发现StSTE12基因可以回复酿酒酵母ScSTE12基因的功能,能够调控酵母细胞的侵入生长。4.以pSilent-1质粒作为载体,构建StSTE12基因的RNA干扰载体,将该载体通过PEG介导的转化方法转化玉米大斑病菌原生质体,通过潮霉素B筛选、PCR检测以及RT-PCR的验证得到了3株StSTE12基因的RNAi转化子。5.对StSTE12基因的RNAi转化子进行分析,发现转化子的致病力均降低,且不能够直接侵染健康的玉米植株,只能通过伤口侵入,但是转化子的毒素活性并不减弱。此外,与野生型菌株相比,转化子的分生孢子产量、黑色素的生物合成明显减少,附着胞发育不正常、膨压降低、穿透玻璃纸的能力下降。以上结果表明,StSTE12基因与玉米大斑病菌附着胞的发育及侵染过程密切有关。