论文部分内容阅读
单唾液酸神经节苷脂(Monosialoganglioside)位于生物体的细胞膜上,主要分布于哺乳动物的中枢神经系统。神经节苷脂作为一种特异性受体,与一些活性物质相互作用,可以促进大脑发育,调节神经系统功能,并且有再生神经组织的作用。临床研究表明,单唾液酸四己糖神经节苷酯(Monosialotetrahexosylganglioside, GM1)对神经细胞有定的保护修复作用,可以用于瘫痪、痴呆、生活能力丧失、老年痴呆、心脑血管意外创伤和帕金森等神经性疾病的治疗。目前的GM1提取分离及纯化工艺复杂,所得产品中也通常残留一些高分子物质杂质及其他神经节苷脂杂质。因此,建立一个方便、快捷的提取方法,获得高纯度的GM1,具有重要的社会意义和经济价值。本课题以鲜猪脑为原材料分离纯化得到GM1,提取分离过程包括丙酮粉的制备、神经节苷脂的萃取、弱阴离子交换层析及凝胶排阻层析,并用氨基键合柱和二醇基柱两种高效液相色谱法和染色法对得到的样品与Sigma公司生产的GM1标准品进行了对照。结果显示,本方法得到的样品与标准品的物理化学性质一致,样品纯度高且不含毒害物质。本论文的主要研究内容如下：①提取分离。将鲜猪脑在冷丙酮中匀浆处理,去除组织中包含的水分和极性水溶性小分子物质,得到丙酮不溶物。丙酮不溶物经一定比例的氯仿-甲醇-水抽提除去中性脂类,上层甲醇-水溶液经旋转蒸发得到粗提取的样品水溶液,粗提取样品产率约为3.36%±0.64%。将所得的样品水溶液脱盐后,进行DEAE Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析。平衡系统为pH7.420mmol/L Tris-HCl缓冲液,洗脱系统为0-70%1.0mol/L NaCl+pH7.420mmol/L Tris-HCl, GM1提取率约为(4.59±0.49)×10-2%。所得GM1样品进一步进行Sephacryl S-100HR凝胶排阻层析分离,洗脱系统为pH7.420.0mmol/L PBS缓冲液,得到纯品GM1,总提取率约为5.02mg/500g湿组织。②样品检测。将得到的GM1样品分别在氨基键合高效液相上进行纯度分析,并附以特征显色反应和二醇基柱高效液相检测,以Sigma公司GM1标准品为对照。结果表明,所得的GM1样品与标准品的物理化学性质一致,并具有较高的纯度。