建兰(CymbidiumW ensifolium)又名剑蕙、四季兰,是兰属地生兰的一种。因株型好、易管理等特点,也常被用作绿化、美化。但地生兰授粉后其种子在自然条件下很难发育成熟,繁殖系数低。且随着生活品质不断提高,人们对观赏植物的性状要求越来越多元化,因此加快培育新品种成为一种迫切需求。无论是将植物进行工厂化规模化生产还是利用现代生物技术手段加快植物性状改变,都需要一个稳定、完整的再生体系为基础。因此本研究将利用由建兰成熟蒴果经无菌萌发形成的根状茎为材料,从根状茎生长、茎段分化出芽、无根苗生根三方面展开讨论,此外,利用石蜡切片技术对建兰器官形态建成过程中细胞变化进行组织学观察,并找出适合建兰无菌苗快速生长的液体培养条件,为建兰工厂化、规模化生长及新品种培育提供理论、技术参考。主要研究结果如下:1.以发育成熟的建兰种子经无菌萌发形成的根状茎为材料,研究了基本培养基、生长素、有机添加物、碳源及蔗糖含量及培养方式对其根状茎生长的影响。结果表明:建兰根状茎生长的最适培养基为1/2 MS +1.2 mg·L-1 NAA+ 0.4 mg·L-16-BA + 50.0 g·L-1 香蕉泥 + 30.0 g·L-1 蔗糖 + 5.0 g·L-1 琼脂 + 1.0 g·L-1 AC,pH 5.4。椰汁有利于根状茎茎端分化,对根状茎的增殖生长无显著促进作用。在碳源比较中,30.0g-L-1麦芽糖效果最佳,但在同等质量浓度下蔗糖作用虽然稍差,差异却不显著,因此考虑成本,宜选用蔗糖为碳源。培养方式以液-固交替培养最好。2.以建兰根状茎及根状茎分化后形成的建兰无根苗为材料,研究了植物生长调节剂、AC、光照条件对根状茎分化以及基本培养基、生长素、有机添加物、pH对建兰无根苗生根的影响。结果表明:建兰根状茎分化的最佳培养基为1/2 MS+ 4.0 mg·L-1 6-BA + 0.3 mg-L-1 KT + 0.2 mg-L-1 NAA + 100.0 ml·L-1 椰汁 + 30.0 g·L-1蔗糖+ 1.0 g·L-1 AC + 5.0 g·L-1琼脂,pH 5.5。最适的生根培养基为1/2 MS+1.0mg·L-1 NAA+30.0g·L-1蔗糖+1.0g·L-1 AC+5g·L-1/琼脂脂,pH5.5。试验中发现光照是建兰根状茎分化的必要条件,且根状茎单生的顶端芽体饱满,后期发育状态好。在培养基中不添加AC会促进根状茎分化,但已形成的丛生芽后期往往不能正常成苗,出现黄化甚至死亡。所以适当添加AC有利于顶芽的正常生长直至成苗。在生根试验中发现NAA对建兰无根苗生根至关重要,浓度过低或过高不利,培养基pH的调节也对生根造成显著影响,培养基以灭菌前pH5.5为宜。3.通过对建兰增殖后根状茎、分化状态下的根状茎以及生根的根状茎进行组织学观察,发现:离体培养下的建兰根状茎已具有根的特征,有表皮、皮层和中柱。根状茎侧生细胞突起后会朝两个方向继续发展:一是长出侧生分枝,继续进行根状茎生长;二是形成分生组织,分化成芽。茎顶端分生组织分化形成芽的过程符合原套-原体学说,最终出现带状叶的形态。建兰无根苗气生根的产生则是激发根状茎内部中柱及其它特定细胞经平周分裂后产生根原始体细胞,根原始体细胞进一步伸长成为根原基,根原基通过伸长向表皮扩张和突破,最终形成不定根。4.以建兰生根无菌苗为材料,研究了基本培养基、GA3、有机添加物、三角瓶规格、摇床转速对液体培养中建兰幼苗生长的影响。结果表明:1/2 MS是建兰无菌苗生长的最佳基本培养基;GA3能显著促进建兰幼苗的伸长,但浓度过高(≧0.3 mg·L-1)会出现建兰叶片狭长,植株徒长现象。椰汁利于建兰无菌苗根的生长,但根系活力无显著差异;麦芽提取物则利于叶片的生长及有机物的积累,经测定其中可溶性糖含量显著高于对照。培养瓶规格以100 ml为宜,添加50ml液体培养基,每瓶放置10株幼苗,转速100 rpm最佳。液体培养30d后,建兰生根幼苗平均根长增加4-5 mm,苗高增加7 mm左右。