犬作为一种受欢迎的动物,在日常生活中不仅可以陪伴人类,还在社会安全和禁毒工作中起重要作用,因此保障犬类健康,预防犬致命性病毒感染极为重要,其中犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）和犬冠状病毒（Canine coronavirus,CCo V）作为具有强传染性的常见犬致病性病毒,对其快速检测具有重要意义。目前虽然已经开发了胶体金试纸等方便的检测方法,但这些方法大多基于抗体检测,很难检测到潜伏期的病原体。考虑到犬类训练中心或犬舍需要更加敏感的检测方法来防止病毒的迅速传播,建立一种简单快速的犬细小病毒和犬冠状病毒检测方法是必不可少的。本文以课题组研发的快速链置换反应（accelerated strand exchange amplification,ASEA）为检测手段,以犬细小病毒为研究对象,对其进行可行性、温度优化、特异性、抗干扰性和灵敏性研究,建立ASEA检测犬细小病毒的实验方法。实验结果表明,ASEA方法检测犬细小病毒的最优引物在61℃和74℃时检测效率最高。引物具有良好的特异性和抗干扰性,可将犬细小病毒DNA同犬、大肠杆菌及8种犬常见感染病毒的基因组核酸进行区分,并且可以将犬细小病毒DNA从上述核酸混合物中检测出来。ASEA方法检测犬细小病毒的最低检测限为4.8 copies/μL,起峰时间为16.6 min,后续结合改进的3 min热裂解方法,整个检测过程可以在大约20 min内完成。基于已建立的ASEA检测犬细小病毒基因组DNA的实验方法,接下来本文对犬细小病毒实际样本进行检测。利用ASEA与实时PCR、胶体金试纸分别对42例有腹泻和呕吐症状的患病犬粪便样本进行检测,比较三种方法对实际样本检测的准确性。结果显示ASEA和实时PCR检测出19例犬细小病毒感染样本,而胶体金试纸检测出16例犬细小病毒感染样本。经ASEA、实时PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳最终证明这三例样本为犬细小病毒感染样本,即ASEA与实时PCR检测准确,胶体金试纸检测有三例假阴性样本。该现象推测是因为此三例样本处于犬细小病毒感染早期,病犬体内抗体未富集到胶体金试纸可检测到的浓度,而ASEA和实时PCR则可在病毒入侵早期检测到病毒核酸。综上,ASEA对犬细小病毒样本的检出率与实时PCR一致,优于胶体金试纸检测。ASEA与实时PCR相比在时间上具有明显优势,与胶体金试纸相比在早期诊断方面更具优势。基于上述研究的ASEA检测犬细小病毒的实验方法,本研究课题与青岛简码基因科技有限公司合作开发了ASEA检测犬细小病毒和犬冠状病毒的核酸检测试剂盒。本课题后续利用两种试剂盒分别对42例患病犬粪便样本进行检测。其中犬细小病毒ASEA检测结果与之前研究内容一致,犬冠状病毒ASEA检测结果与胶体金试纸检测结果一致,且经试剂盒和胶体金试纸两种方法检测,有2例样本同时被检出犬细小病毒和犬冠状病毒,证实犬细小病毒和犬冠状病毒可以共同感染宿主。综上,ASEA检测犬细小病毒和犬冠状病毒的两种核酸检测试剂盒产品性能较好,适合投入市场并有极大的潜力。