双醋瑞因减轻小鼠角膜碱烧伤炎症反应

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本文从以下几个部分展开论述:  第一部分 小鼠角膜碱烧伤模型的建立  目的:  建立Ⅱ-Ⅲ度角膜碱烧伤小鼠模型,了解此轻度角膜碱烧伤模型的炎症反应。  方法:  将5μL0.3mol/L的氢氧化钠溶液滴于直径为2mm的圆形滤纸片上,60s后取出并在干燥滤纸上吸除多余的氢氧化钠溶液,随后立即均匀地贴于小鼠角膜中央60s,然后取下滤纸并用20mL无菌性生理盐水冲洗小鼠结膜囊1min,制作小鼠角膜碱烧伤模型。造模后观察不同时间点小鼠的角膜临床评分、角膜上皮缺损面积及角膜炎症细胞的浸润情况。  结果:  角膜碱烧伤后3d临床评分达最高,2d和3d时间点分别较1d与2d时间点临床评分显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);4d、6d、7d和9d时间点分别较其前一时间点临床评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。造模后小鼠角膜上皮于7d愈合,角膜上皮缺损面积在1d、3d及4d较其前一时间点减少,差异有统计学意义(P<0.01),虽然其他时间点上皮缺损面积亦逐渐减少,但差异较前一时间点相比差异不明显。角膜中性粒细胞浸润情况,在1d和2d时间点相比较前一天中性粒细胞的浸润明显增多,差异有统计学意义(P<0.01),3d、5d和9d时间点分别较2d、4d与7d角膜中性粒细胞浸润减少,且差异有统计学意义(P<0.05)。巨噬细胞浸润在造模后1d、3d和4d分别较其前一天均有显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),虽然其他时间点巨噬细胞亦逐渐增加,但差异较其前一时间点不明显。小鼠角膜新生血管定量发现,造模后1d、4d和9d角膜新生血管较其前一天增加,差异有统计学意义(P<0.05),其他时间点角膜新生血管也逐渐增加,但是差异较其前一时间点不明显。  结论:  用0.3mol/L氢氧化钠溶液建立的小鼠角膜碱烧伤模型,临床评分3d达最高,角膜上皮7d愈合,中性粒细胞2d达高峰,巨噬细胞及新生血管在观察时间内随时间逐渐增加。  第二部分 双醋瑞因减轻小鼠角膜碱烧伤的炎症反应  目的:  本实验研究双醋瑞因滴眼制剂对小鼠角膜碱烧伤混浊度、病灶面积及上皮缺损面积的治疗作用,了解双醋瑞因减轻小鼠角膜碱烧伤的炎症反应程度。  方法:  将角膜碱烧伤造模成功的小鼠分为三组:双醋瑞因组、地塞米松组、生理盐水组,分别给予双醋瑞因滴眼制剂、地塞米松滴眼制剂、生理盐水滴眼制剂滴眼,比较2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d、9d时间点各组小鼠的角膜临床评分、上皮缺损面积,比较2d、3d、5d、7d、9d时间点各组小鼠炎症细胞的浸润程度,比较2d、3d、5d时间点各组小鼠的角膜MPO活性的大小。  结果:  角膜碱烧伤后4d、5d、6d、7d、8d、9d双醋瑞因组角膜临床评分明显较生理盐水组低,差异有统计学意义(P<0.01);地塞米松组3d、4d、5d、6d、7d、8d、9d角膜临床评分较生理盐水组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);双醋瑞因组3d角膜临床评分较地塞米松组高,差异有统计学意义(P<0.05)。对于角膜上皮缺损而言,双醋瑞因组3d、4d、5d、6d上皮缺损面积均小于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);各时间点地塞米松组与生理盐水组相比角膜上皮缺损无明显差异;各时间点地塞米松组与双醋瑞因组相比角膜上皮缺损无明显差异。对中性粒细胞进行统计发现,造模后2d、3d、5d、7d、9d双醋瑞因组中性粒细胞数量明显少于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);地塞米松组3d、5d、7d和9d中性粒细胞浸润少于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.01);2d双醋瑞因组中性粒细胞浸润少于地塞米松组,差异有统计学意义(P<0.01)。对巨噬细胞进行统计发现,造模后双醋瑞因组巨噬细胞5d、7d和9d均较生理盐水组浸润少,差异有统计学意义(P<0.01);造模后5d、7d和9d地塞米松组浸润少于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);双醋瑞因组巨噬细胞于造模后7d和9d较地塞米松组少,差异有统计学意义(P<0.05)。通过对MPO活性测定发现,双醋瑞因组各时间点MPO活性均较生理盐水组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);各时间点地塞米松组MPO活性低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.01);2d双醋瑞因组MPO活性高于地塞米松组,差异有统计学意义(P<0.01)。  结论:  双醋瑞因能够显著减轻小鼠角膜碱烧伤的炎症反应,改善角膜碱烧伤的预后。
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