T790M突变所致吉非替尼耐药肺腺癌细胞放射敏感性变化及耐药性逆转的研究

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第一部分:T790M突变所致吉非替尼耐药肺腺癌细胞放射敏感性变化的研究目的:观察T790M突变所致吉非替尼耐药肺腺癌PC-9/GR细胞放射敏感性的变化情况并检测其放射敏感性相关分子标识物的表达水平变化。方法:应用液相芯片法检测PTEN mRNA的表达水平;应用western blot法检测PTEN、 p-mTOR、p-AKT蛋白质的表达水平;采用集落形成试验观察受射线照射细胞的存活情况。结果:1、液相芯片法检测出PC-9细胞PTEN mRNA的相对含量为0.04663±0.00003,PC-9/GR细胞PTEN mRNA的相对含量为0.07733±0.00002。经统计学分析,两者具有显著性差异(p<0.05)。2、western blot法检测出PC-9细胞的PTEN、p-mTOR、p-AKT蛋白质相对含量分别为:0.12±0.03、0.49±0.05、0.76±0.14,PC-9/GR细胞的PTEN、p-mTOR、 p-AKT蛋白质相对含量分别为:0.65±0.25、0.15±0.04、0.34±0.07。经统计学分析,此三种分子标识物在两种细胞中的表达皆具有显著性差异(p<0.05)。3、集落形成实验显示:在不同剂量(0Gy、lGy、2Gy、4Gy、6Gy)6MV X线作用下,PC-9及PC-9/GR细胞的存活分数分别由(100.00±0.00)%降至(6.41±0.37)%,由(100.00±0.00)%降至(1.20±0.23)%。经统计学分析,每种细胞实验组存活分数与对照组(0Gy)相比都具有显著性差异;1Gy剂量实验组的细胞存活分数两组无显著性差异,其余实验组在同一剂量下的存活分数,PC-9/GR细胞都低于PC-9细胞,且具有统计学差异。结论:在体外试验条件下,PC-9/GR细胞的放射敏感性较其亲代PC-9细胞升高。第二部分:T790M突变所致吉非替尼耐药肺腺癌细胞经射线照射后耐药性逆转的研究目的:观察经射线照射后PC-9/GR细胞吉非替尼耐药的逆转情况。方法:应用MTT比色法检测细胞的生长抑制情况。结果:1、MTT法显示在不同浓度吉非替尼(0.1μmo1/1、0.5μmo1/1、1μmo1/1、5μmo1/1、10μmo1/1、20μmo1/1、30μmo1/1)作用下,未经射线照射的PC-9/GR细胞生长抑制率从(0.51±0.08)%增长到(22.23±2.63)%,经2Gy6MVX线照射后的PC-9/GR细胞生长抑制率从(28.12±3.12)%增长到(68.20±3.55)%。经统计学分析,同一吉非替尼浓度下两组细胞生长抑制率都具有显著性差异(p<0.05)。2、经计算,吉非替尼对2Gy6MVX线照射后的PC-9/GR细胞的IC50值为(11.09±1.92)μnmo1/1,对未经射线照射的PC-9/GR细胞的IC50值为(31.78±2.11)μmo1/1,两者相比具有统计学差异(p<0.05)。结论:在体外试验的条件下,射线照射后的PC-9/GR细胞对吉非替尼的敏感性较未经射线照射的PC-9/GR细胞升高。
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