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研究背景子宫内膜在人体内作为一个高度再生的组织，在雌孕激素的作用下发生周期性的变化。雌激素可促进子宫内膜生长，其在体内的变化受下丘脑-垂体-卵巢轴的调节。当一些原因导致子宫内膜损伤，使子宫前后壁粘连、宫腔闭锁，就可形成宫腔粘连(Intrauterine adhesions，IUA)。近年来随着人流、药流手术及宫腔操作的增多，IUA已成为妇科常见病之一，并且成为不孕、流产、早产的一项重要原因。IUA治愈率低下，手术分离后粘连易发，严重影响着广大女性的身体及心理健康。因此粘连分离术后如何防止粘连复发、促进内膜生长的治疗是临床工作的一大难题。目前IUA分离术后多采用人工周期治疗2～3个月促进子宫内膜的再生，防止粘连复发。但雌激素剂量及疗程目前尚无明确规定，主要是根据患者的粘连程度、类型以及术者的经验，且治疗效果并不太满意，子宫内膜的生长并不能得到很好的改善。有些学者认为对雌激素生理剂量无效的子宫内膜，可加大雌激素剂量促进子宫内膜的生长。但也有研究发现子宫内膜基底层严重受损后，内膜再生能力下降，高雌激素水平可能导致某些纤维化细胞因子水平的上升，反而促进IUA的形成。目前，雌激素的不同用量以及应用时间的长短对子宫内膜生长作用的影响尚不明确。感染对子宫内膜生长的影响目前尚无明确定论，一些学者认为宫腔操作后没有必要使用抗生素预防感染。但是一旦出现感染，炎症反应可能导致子宫内膜损伤加剧，并引起子宫内膜修复障碍，加速IUA的再形成。在所有的致炎因子中，前列腺素E2(ProstaglandinE2，PGE2)是一种重要的细胞生长和调节因子，对多种细胞的增殖及生物学功能有调节作用，并与子宫内膜生理及病理密切相关。它能诱导全身炎症反应，增强细胞中胶原生物的合成，促进炎性区域发生纤维化改变。但前列腺素E2对子宫内膜生长的影响以及对子宫内膜细胞有何种调节作用尚不明确。目的本课题通过子宫内膜基质细胞体外培养传代系统，应用不同浓度、不同时间雌二醇及炎症因子前列腺素E2作用于细胞，采用MTT法及Real-time PCR法观察雌二醇及炎症因子PGE2对子宫内膜基质细胞增殖情况的影响，为进一步探索宫腔粘连分离术后辅助雌激素治疗以及炎症对内膜增长有无影响提供一个前期的实验依据。材料和方法1.采用胶原酶消化法及筛网法分离培养人子宫内膜基质细胞，MTT法绘制细胞正常生长曲线，观察细胞生长周期。通过形态学及免疫组化法对培养的细胞进行鉴定。2.将人子宫内膜基质细胞分为对照组：加入正常培养液。雌二醇组：分别加入浓度为1x10-9、10-8、10-7、10-6mol/L雌二醇。雌二醇+PGE2组：同时分别加入不同浓度的雌二醇(10-9、10-8、10-7、10-6mol/L)和PGE2(浓度为50ng/L)。PGE2组：单独加入PGE2(浓度为50ng/L)。MTT法间接测定各组别子宫内膜基质细胞增殖情况，实时荧光定量PCR法测定各组细胞内PCNAmRNA表达的变化。3.将所有实验数据以均数±标准差(x±S)表示，两个独立样本间的比较采用t检验方法分析数据之间的差异，各组间资料的分析采用单因素方差分析法，采用LSD-t法进行组间两两比较。各组不同时间点的比较采用重复测量资料设计法分析，检验水准α=0.05。结果1.细胞形态学特点：培养出的基质细胞多为多角形，细胞两端有多个短小突起，细胞排列无极性，贴壁生长。随着细胞的传代培养，细胞逐渐拉长成梭形，具有成纤维细胞形态。2.细胞生长周期及免疫组化结果：细胞生长周期一般为7-10天，第1天为潜伏生长期，第2-4天进入对数生长期，5-6天后达平台期，7天后逐渐萎缩消退。基质细胞特异的波形蛋白抗体(Vimentin)染色阳性，阳性细胞胞质呈棕黄色，角蛋白抗体染色阴性。3.随着作用时间的延长，雌二醇组基质细胞增殖率明显升高，细胞增殖呈时间依赖性，差异有统计学意义(P<0.05)，而各组浓度之间并无明显差异(P>0.05)。24h雌二醇+PGE2组与雌二醇组比较，细胞平均增殖率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。72h雌二醇+PGE2组细胞随着作用时间的延长虽有增长趋势，但与雌二醇组相比，细胞生长速率明显下降(P<0.05)。PGE2组细胞增殖率随着作用时间的延长明显下降(P<0.05)。4.随着作用时间的延长，72h雌二醇组细胞PCNA mRNA的相对表达量明显升高，与48h、24h相比，差别均有统计学意义(P<0.05)，而各组浓度之间无明显差异(P>0.05)。24h雌二醇+PGE2组与雌二醇组比较，PCNA mRNA的相对表达量升高(P<0.05)。72h雌二醇+PGE2组细胞PCNAmRNA的相对表达量随着作用时间的延长而升高，但与雌二醇组相比，明显下降(P<0.05)。PGE2组细胞PCNAmRNA的相对表达量随着作用时间的延长明显下降(P<0.05)。结论1.体外成功分离培养人子宫内膜基质细胞，细胞形态学及波形蛋白染色阳性均符合子宫内膜基质细胞特征。2.雌二醇可促进子宫内膜基质细胞的增殖，但增殖作用非浓度依赖性而是时间依赖性。3.炎症因子PGE2可调节子宫内膜细胞的生长。