原位凝胶(in situ gel)是一种新型的药物传递系统,在使用前是自由流动的液体,当环境条件变化时可迅速发生相转变,形成半固体状态凝胶,有利于局部给药和延缓药物释放。温敏型在体凝胶(thermosensitive in situ gel)是一种仅随贮藏条件和用药部位的温度变化而发生相转变的原位凝胶。本课题通过选取合宜的温敏材料、模型药物及溶媒制备了温敏型原位凝胶,对该原位凝胶的胶凝温度等特性进行了研究,探讨了温敏型原位凝胶的溶蚀及药物释放规律,考察了温敏型原位凝胶的体外胶凝时间,肌肉刺激性及稳定性。在国内兽医领域首次制备了乳酸环丙沙星(Ciprofloxacin lactate,CPFL)原位凝胶。具体内容如下：1温敏型原位凝胶的温敏材料及模型药物筛选选择合宜的基质并考察其水溶液胶凝特性。以给药次数、半衰期短、抗菌谱、用途广泛程度及良好的水溶性为指标筛选出合宜的抗菌模型药。结果表明：P407具有特殊的反向胶凝性质,无毒,刺激性小,生物相容性好,具有良好的流变学特征及缓释作用而被选为温敏材料。P407水溶液浓度接近或高于17.6%(g/mL)时,才具有胶凝能力；泊洛沙姆胶凝能力显现出强烈的浓度依赖性。CPFL抗菌谱广、应用广泛、半衰期短、给药次数多及很好的水溶性而被最终选定为模型药。泊洛沙姆溶液中能溶解高达20%(g/mL)的CPFL,可见,泊洛沙姆的载药能力比较强,能满足临床需要。2CPFL温敏型原位凝胶的溶媒筛选通过考察CPFL泊洛沙姆组合物在缓冲溶液中的稳定性,以探寻影响乳酸环丙沙星泊洛沙姆溶液稳定性的因素和筛选最佳溶媒。乳酸、乳酸-乳酸钠缓冲液及盐酸控制的CPFL泊洛沙姆溶液在1周内便析出沉淀。药物浓度在10%时,醋酸-醋酸钠缓冲液不能保证CPFL泊洛沙姆溶液的稳定性；pH值3.6的醋酸-醋酸钠缓冲液可保证8%CPFL泊洛沙姆溶液的稳定性。结果表明：CPFL在泊洛沙姆溶液中的稳定性主要受pH值、pH调节剂、药物浓度及温度的影响；醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=3.6,0.2mol/L)适合作为CPFL泊洛沙姆组合物的溶媒,同时又兼保证CPFL(≤8%)在该体系中稳定的稳定剂。3CPFL温敏型原位凝胶的制备及特性研究采用冷溶法制备原位凝胶溶液；采用试管倒转法考察泊洛沙姆溶液胶凝温度及辅料、主药对其胶凝温度的影响。以胶凝温度为指标筛选处方。试验结果表明：①P407浓度接近或高于18%(g/mL)时,才具有胶凝能力；泊洛沙姆胶凝能力显现出强烈的浓度依赖性。②0.03%的依地二酸钠(EDTA.2Na)作为该制剂的金属离子络合剂,0.15%的亚硫酸氢钠(NaHS04)作为抗氧化剂,0.01%的苯扎溴铵为防腐剂。③EDTA.2Na及NaHS04药用辅料对胶凝温度没有明显影响,苯扎溴铵可以略微提高胶凝温度,CPFL可以明显提高胶凝温度。④初步优选的处方及其胶凝温度如下：24%P407+2%P188+8%CPFL+0.03%EDTA-2Na+0.15%NaHS04+0.01%苯扎溴铵,24%P407+3%P188+8%CPFL+0.03%EDTA-2Na+0.15%NaHS04+0.01%苯扎溴铵及23%P407+1%P188+8%CPFL+0.03%EDTA-2Na+0.15%NaHS04+0.01%苯扎溴铵,对应的胶凝温度为32.5℃、33.5℃及31.4℃。因此,通过调节泊洛沙姆407和188的比例,可得到具有适宜胶凝温度的原位凝胶。4CPFL温敏型原位凝胶的体外溶蚀及药物释放行为①采用紫外分光光度法建立了释放介质中CPFL的含量测定方法。方法的精密度、回收率、稳定性均符合方法学的要求,CPFL在1.0-12.0μg·mL-l范围内浓度与吸光度间有良好的线性关系,处方辅料对CPFL的测定无干扰。②采用无膜溶出法和紫外分光光度法考察了原位凝胶的体外溶蚀和药物释放行为及其影响因素。不论释放介质是水还是生理盐水,试验条件下优化处方制备的CPFL原位凝胶体外的溶蚀行为及药物释放行为均遵循Higuchi平面扩散模式动力学方程。以缓释时间为指标筛选出了最佳CPFL原位凝胶处方即24%P407+2%P188+8%CPFL+0.03%EDTA·2Na+0.15%NaHS04+0.01%苯扎溴铵。释放面积增大,凝胶溶蚀及药物释放速率显著增加；但振荡频率增大,凝胶的溶蚀及药物释放并没有显著的改变,它们的溶蚀及药物释放行为的相似性很高(f2均接近100)。③凝胶溶蚀与CPFL释放的相关性考察试验表明溶蚀与扩散是原位凝胶药物释放的两种机制,且溶蚀是控制释药的主要因素。5RP-HPLC法测定CPFL温敏型原位凝胶中主药的含量建立CPFL泊洛沙姆原位凝胶中CPFL含量测定的高效液相色谱法。根据光谱扫描的结果确定检测波长为279nm。其他色谱条件为：Extreme C18柱(5μm,25cm×4.6mm)为色谱柱,流动相为0.025mol·L-1磷酸溶液(三乙胺调节pH至3.0)乙腈(87：13),流速为1.0mL·min-1,进样量为50μL。乳酸环丙沙星检测浓度线性范围为1.25-40μg·mL-1(r==1),平均回收率99.55%(RSD=1.68%,n=9).本法操作简便、快速,结果准确可靠,重复性较好,可用于测定CPFL原位凝胶中乳酸环丙沙星的含量。6CPFL温敏型原位凝胶体外胶凝时间测定及肌肉刺激性试验以试管倒置法测定CPFL原位凝胶的胶凝时间；兔背侧皮下注射原位凝胶观察体内胶凝情况；以无菌生理盐水为对照,采用同体自身对照法评价CPFL泊洛沙姆原位凝胶对兔股四头肌的刺激性。5批CPFL原位凝胶的胶凝时间为93～114秒；皮下注射3～5min后,给药部位可见凝胶。注射生理盐水的四块股四头肌的反应级总和为0,给药四块股四头肌反应级的总和为4(<10),且股四头肌反应级的最高与最低之差不大于2,符合肌肉刺激性规定。可见,CPFL原位凝胶在动物体温下能迅速胶凝；CPFL原位凝胶可用于肌肉注射,但宜深部肌注。7CPFL温敏型原位凝胶的稳定性初步研究初步考察CPFL温度敏感型原位凝胶制剂的稳定性。CPFL泊洛沙姆原位凝胶在低温、室温、离心、高压灭菌的条件下,其性状、pH、胶凝温度及含量(RSD<2%)与初始相比均没有发生明显变化。40℃避光放置后,与初始相比,2批该制剂pH值都略有上升(约0.03～0.06),溶液颜色略微变浅,含量有所下降(RSD=2.32%)。初步加速稳定性试验及长期稳定性试验显示,本制剂的性状、pH、胶凝温度及含量(RSD<2%)也没有发生明显的变化。结果表明本制剂能在避光室温环境下贮存。