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在果酒生产过程中添加适量的果胶酶,有利于提高出汁率与果酒的澄清等。但遗憾的是,目前国内果酒行业所使用的果胶酶主要依赖进口。因此,亟待开发具有自主知识产权的果酒用果胶酶。本研究从8个不同的葡萄园采集土样,利用透明圈法、卢戈氏碘液染色与DNS法,进行筛选高产果胶酶的菌株。随后,将筛选所得的产果胶酶酶活最高的菌株,进行紫外诱变与两次亚硝基胍(NTG)诱变,最终获得一株高产果胶酶的菌株。本研究结果,为开发具有自主知识产权的果酒用果胶酶奠定了基础。本研究的主要内容与结果如下:1.以8个不同葡萄种植园的土壤为材料,使用透明圈法与卢戈氏碘液法相结合进行产果胶酶菌株的初筛,共获得1132株产果胶酶的微生物菌株。采用D NS法进行复筛,获得18株高产果胶酶菌株。经鉴定,这18株高产果胶酶菌株分别是Aspergillus tubingensis(gc5-2D、Rn14-88A),Cladosporium ramotenell-um(gxy4-6),Rhizopus oryzae(gxy7-4、gxy16-1),Alternaria alternata(X JC3-2’、XJC3-21),Aspergilus terreus(gxy12-21、gxy10-2、gxy12-2),Aspe-rgillus ustus(Rn14-81A),Trichosporon asahii(XJC4-3B-2、gxy11-3),Tal-aromyces pinophilus(XJC13-7、gxy8-1),Blastobotrys proliferans(gc14-71D、XJC3-2、XJC4-3B-3)。其中,A.tubingensis Rn14-88A的果胶酶酶活最高,为8363.22 U/mL,其单体酶中的聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)、果胶裂解酶(Pectin lyase,PL)、果胶甲酯酶(Pectin methyl esterase,PE)、纤维素酶(Cellulase)的比酶活分别为233.57 kU/mg、65.26 kU/mg、452.63 kU/mg、106.16 kU/mg。2.将A.tubingensis Rn14-88A进行1次紫外诱变与2次亚硝基胍(NTG)诱变,获得一株果胶酶活力提高的突变菌株。A.tubingensis Rn14-88A经过紫外诱后,获得一株果胶酶活性提高9.99%的突变菌株A.tubingensis R-7-2-4,其果胶酶酶活为9254.75 U/mL;进一步将A.Tubingensis R-7-2-4进行1次NTG诱变,获得一株比A.Tubingensis R-7-2-4酶活提高6.36%的菌株A.Tubingensis Y1-3-2-6,其酶活为9843.34 U/mL;在此基础上,将A.Tubingensis Y1-3-2-6进行NTG诱变,最终获得了一株酶活为21864.34 U/mL的菌株A.Tubingensis Y2-6-3-4,与Y1-3-2-6相比果胶酶活力提高了20.20%,与出发菌株A.tubingensis Rn14-88A相比果胶酶活力提高了161.44%。3.将A.tubingensis Y2-6-3-4的产果胶酶特征与7款商品果胶酶相比较,Y2-6-4-3的PG比酶活为393.92 kU/mg,高于商品酶LALLZYME-BETA、LALLZYME-HC;PL比酶活为33.15 kU/mg,高于商品酶LALLZYME-C、LALLZY ME-CUVEE BLANC、LALLZYME-HC、LALLZYME-HC、LALLZYME-EX-V;PE比酶活为22.33 kU/mg,低于7款商品酶;纤维素酶比酶活为31.25 kU/mg,在最后一次诱变前的比酶活均高于LALLZYME-BETA、LALLZYME-CUVEE BLANC、LALLZYME-CUVEE ROUGE。因此,A.tubingensis Y2-6-3-4是具有商业价值的高产果胶酶菌株。