论文部分内容阅读
目的:肿瘤相关巨噬细胞（Tumour associated-macrophages,TAMs）常表现为M2表型,参与肿瘤的生长、进展和治疗耐药等过程,是肿瘤潜在的治疗靶点。本研究旨在探究THP-1来源的TAMs对宫颈癌SiHa细胞生物学特性的影响,从而为改善临床患者诊治及预后提供新方法。方法:1、佛波脂（PMA）和IL-4将THP-1细胞诱导为TAMs,流式细胞仪检测THP-1和TAMs表面分子CD204和CD206的表达。2、建立TAMs-SiHa细胞共同培养的模型,比较SiHa细胞形态结构的改变。3、MTT法测定TAMs培养上清处理SiHa细胞不同时间点的增殖活力。4、EdU法测定单个SiHa细胞的增殖能力。5、JC-1法测定SiHa细胞线粒体膜电位水平的改变。6、划痕实验、Transwell实验测定SiHa细胞迁移和侵袭的能力。7、Western blot分析SiHa细胞中生物学行为相关蛋白的表达。8、RT-PCR测定SiHa细胞转录因子Snail的mRNA表达水平。9、数据分析采用GraphPad Prism（Version 7）软件,实验结果用?x?s表示,两组数据比较采用独立样本t检验。两个率之间的比较采用?2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1、经PMA、IL-4诱导完成的细胞表面标记CD204和CD206表达与阴性对照相比明显增加（P<0.05）,提示TAMs诱导成功。2、与TAMs共培养的SiHa细胞形态变化异常明显,边界不清,排列杂乱,融合度降低,呈现间质细胞形态。3、共培养组SiHa细胞增殖活力显著升高,增殖有关蛋白CDK4、CyclinD1含量明显增加（P<0.05）。4、共培养组SiHa细胞凋亡被抑制,促凋亡蛋白Bax含量明显减少,抗凋亡蛋白Bcl-2含量明显增加（P<0.05）。5、共培养组SiHa细胞迁移和侵袭能力显著增强,EMT相关蛋白E-cadherin含量明显降低,N-cadherin、Vimentin表达升高,转录因子Snail的mRNA表达水平升高（P<0.05）。6、共培养组SiHa细胞中p-AKTser473、p-GSK-3βser9蛋白含量明显增加,抑制剂组（LY294002）中p-AKTser473、p-GSK-3βser9蛋白表达水平较共培养组显著降低,而抑制剂LY294002对p-AKTser473、p-GSK-3βser9蛋白表达水平的抑制作用可以被TAMs部分逆转。各组中总的AKT、总的GSK-3β含量变化不明显。结论:1、TAMs可以促进SiHa细胞的增殖,并抑制其凋亡,该现象的发生可能与调控CDK4、CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白的表达有关。2、TAMs可以促进SiHa细胞的迁移和侵袭,该现象的发生可能是通过激活AKT/GSK-3β/Snail信号通路加快SiHa细胞的EMT进展进而促进其侵袭和转移。