【摘 要】
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目的:本实验通过研究Pokemon对E2F-4在肝癌细胞HepG2中的转录调控作用,为肿瘤的基因治疗提供新的靶点。方法:构建E2F-4表达质粒和不同片段长度的E2F-4启动子,通过脂质体介导
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目的:本实验通过研究Pokemon对E2F-4在肝癌细胞HepG2中的转录调控作用,为肿瘤的基因治疗提供新的靶点。方法:构建E2F-4表达质粒和不同片段长度的E2F-4启动子,通过脂质体介导将Pokemon表达质粒和E2F-4启动子、E2F-4表达质粒和Pokemon启动子转染入肝癌细胞HepG2中,用双荧光素酶报告基因法检测转染后E2F-4、Pokemon的转录活性;real time PCR法检测转染Pokemon表达质粒后E2F-4 mRNA的表达;染色质免疫共沉淀技术检测细胞内Pokemon蛋白与E2F-4启动子作用的关系。结果:Pokemon表达质粒对不同片段长度的E2F-4启动子均有抑制作用,E2F-4表达质粒对不同片段长度的Pokemon启动子也均有抑制作用。转染Pokemon表达质粒后E2F-4 mRNA表达受到明显的抑制。染色质免疫共沉淀技术显示:细胞内Pokem -on可通过直接结合E2F-4启动子来调控E2F-4的表达。结论:Pokemon在肝癌细胞HepG2中表达,有抑制E2F-4启动子活性的作用, Pokemon可直接与E2F-4启动子结合,可下调E2F-4的mRNA水平,抑制E2F-4的表达。E2F-4在肝癌细胞HepG2中亦可以抑制原癌基因Pokemon的启动子活性。
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