AHVAC-Ⅰ诱导人原代胃癌细胞凋亡机制的研究

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目的:分离纯化人原代胃癌细胞,探究皖南蝮蛇毒抑瘤组分-I(Agkis-trodon halys venom anti-tumor component-I,AHVAC-Ⅰ)对人原代胃癌细胞增殖的作用并深入研究其相关作用机制。方法:胰酶消化法和差速贴壁法分离和纯化出的原代胃癌细胞为体外研究对象,以不同浓度的AHVAC-Ⅰ处理人原代胃癌细胞24h后,采用细胞增殖和毒性检测法(Cell Counting Kit-8,CCK-8法)检测人胃癌原代细胞的增殖抑制率,得出AHVAC-Ⅰ的对人胃癌原代细胞的半数抑制浓度(IC50)。根据IC50结果设置4组AHVAC-Ⅰ(0、4、8、16μg/ml)实验浓度组,用不同浓度的AHVAC-Ⅰ分别处理人胃癌原代细胞24h后,采用苏木素-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining,HE)、流式细胞术及免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测AHVAC-Ⅰ诱导人胃癌原代细胞发生凋亡的效应;运用ELISA法评估AHVAC-Ⅰ作用细胞后氧化应激水平,蛋白印迹法检测Bax、Cyt-c、Caspase-3、bcl-2蛋白的表达水平。结果:1、成功分离培养人原代胃癌细胞7例;2、AHVAC-I处理人原代胃癌细胞24h后,CCK-8实验结果显示,AHVAC-I能够呈浓度依赖性有效地抑制细胞增殖,数据分析IC50值为17.77457μg/ml。免疫组化法和流式细胞检测结果表明AHVAC-I可通过促进人胃癌原代细胞发生凋亡,进而有效抑制人胃癌原代细胞的增殖,且这一效应呈剂量依赖性。3、AHVAC-I作用人原代胃癌细胞24h后,ROS表达水平和Mn-SOD活性随AHVAC-I浓度的增加而增加,细胞总抗氧化能力随AHVAC-I浓度的增加而降低;Western blot结果显示,AHVAC-Ⅰ可显著提高人胃癌原代细胞Cyt-c、Bax和Caspase-3蛋白表达水平,降低bcl-2蛋白表达水平。结论:AHVAC-Ⅰ能够有效的抑制人原代胃癌细胞的增殖,且呈剂量依赖效应,并通过活化ROS-Bax途径,激活内源性线粒体凋亡途径诱导人原代胃癌细胞凋亡;
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