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目的:通过含药血清实验,研究复方菝葜颗粒对肺癌NSCLC A549细胞P53mRNA及细胞周期、凋亡率的影响,探讨复方菝葜颗粒治疗肺癌的部分作用机制。
方法:
1.分组:将NSCLC A549细胞随机分为中药实验组、西药对照组和正常对照组。中药实验组用10%的含药血清培养肺癌细胞;西药对照组用3μg/ml的顺铂培养;正常对照组用10%的正常大鼠血清培养。
2.实验部分:①大鼠血清提取:雄性SD大鼠30只随机分为药物血清组(中药组)、正常血清组(对照组),每组15只。中药组予以复方菝葜颗粒喂服,对照组给予相同剂量的蒸馏水。给药6次,末次给药后2h无菌条件下自左心室取得中药组血清及对照组血清,灭活、除菌。②细胞培养:分别在细胞培养的Oh,24h,48h和72h进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,观察各组细胞生长状况。③流式细胞技术和RT-PCR检测:细胞培养48小时后制成单细胞悬液,流式细胞技术检测NSCLC细胞的细胞周期及凋亡率;半定量RT-PCR检测细胞中抑癌基因P53mRNA的表达。
结果:
1.细胞培养24小时后,中药实验组、西药对照组和正常对照组三组的细胞数无明显差异。培养48h后,三组细胞数均有所增加,中药实验组和西药对照组两组细胞数比较无明显差异;但明显少于正常对照组,与之相比有显著性差异。
2.培养48小时后,中药实验组和西药对照组G<,1>细胞数、凋亡率明显高于正常对照组相,与之相比有显著性差异。中药实验组与西药对照组各期细胞数、凋亡率无明显差异。
3.中药组实验和西药对照组p53mRNA的表达均高于正常对照组,与之相比有显著性差异;中药实验组与西药对照组无明显差异。
结论:复方菝葜颗粒能够抑制NSCLC细胞的生长,上调NSCLC细胞p53mRNA的表达。复方菝葜颗粒治疗NSCLC的机制之一可能是通过上调抑癌基因p53mRNA的表达,将癌变的细胞阻滞在G<,1>期,诱导肺癌细胞凋亡。