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目的:本实验比较WAR-5与盐酸法舒地尔(Fasudil)对MOG35-55免疫诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的疗效,并从不同角度探究其可能的治疗机制。为今后WAR-5的临床使用提供实验和理论依据。方法:采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides 35-55,MOG35-55)免疫雌性C57BL/6小鼠建立慢性EAE模型,并随机分为EAE对照组、WAR-5治疗组和Fasudil治疗组。免疫后第3天,开始分别腹腔注射WAR-5、Fasudil及生理盐水至免疫后第27天。观察并比较各组小鼠临床症状评分。免疫后第28天处死动物,制作脊髓冰冻切片进行HE染色、髓鞘染色及CD4、CD68、NGF、BDNF和synaptophysin的免疫荧光染色。提取蛋白用Western blot法检测ROCK II、i NOS和Arg-1的表达。结果:1.与Fasudil治疗作用相近,WAR-5可显著改善EAE的临床症状,推迟起病时间(P<0.05)。且WAR-5和Fasudil两药在延迟EAE起病时间,降低临床评分上作用相近,差异无统计学意义。2.与Fasudil相比,WAR-5可更有效地抑制小鼠脑内ROCK II的表达(P<0.05)。3.与Fasudil作用相近,WAR-5治疗可减少EAE小鼠脊髓白质髓鞘脱失,增加脊髓灰质内突触素(synaptophysin)蛋白的表达。髓鞘染色显示,EAE对照组小鼠脊髓白质区可见斑片状髓鞘脱失,而WAR-5和Fasudil治疗可有效减少髓鞘脱失(分别P<0.001,P<0.01)。WAR-5和Fasudil两治疗组相比,差异无统计学意义。免疫荧光染色显示,EAE对照组小鼠脊髓synaptophysin蛋白的表达较少,WAR-5及Fasudil治疗组synaptophysin蛋白的表达较多。4.与Fasudil作用相近,WAR-5可显著抑制CNS内炎性细胞的浸润。HE染色显示,EAE对照组小鼠脊髓内呈现大量炎性细胞浸润,WAR-5及Fasudil可抑制炎性细胞浸润(均P<0.01)。免疫荧光染色显示,与EAE对照组相比,WAR-5及Fasudil均可有效减少CNS内CD4+T细胞及CD68+巨噬细胞的浸润(均P<0.001),Fasudil和WAR-5两治疗组相比,差异无统计学意义。5.与EAE对照组相比,WAR-5与Fasudil均可有效降低脾内i ONS的表达(P<0.05),增加脾Arg-1的表达(分别P<0.01,P<0.05),提示WAR-5及Fasudil治疗可部分逆转M1型巨噬细胞至M2型。6.WAR-5与Fasudil均可有效增加CNS内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)(P<0.05)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophin factor,BDNF)(分别P<0.05,P<0.01)的表达。Fasudil和WAR-5两治疗组相比,差异无统计学意义。7.与Fasudil相比,WAR-5的扩血管副作用小,细胞毒性小。结论:WAR-5对EAE小鼠显示了良好的治疗效果,WAR-5与Fasudil两药在延迟EAE起病时间,降低临床评分上作用相近。治疗机制可能是其抑制了EAE小鼠ROCK II的表达,减少CNS内炎性细胞浸润,部分逆转脾脏M1型巨噬细胞至M2型,从而减轻炎症反应。同时,增加了CNS内NGF,BDNF和synaptophysin的表达,促进轴突再生。此外,WAR-5还具有扩张血管副作用小,细胞毒性小的优点。