玛咖中多糖的提取,分离纯化与简单的结构鉴定

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玛咖(Maca)是药食两用植物,特产于南美洲秘鲁,当地印加人将其用做补药,称其为秘鲁人参。许多科研工作证明玛咖多糖具有不同的生理活性,如抗肿瘤功能,增强免疫调节作用,降脂活性,抗菌功能等作用,具有巨大的可开发利用价值。本文完善了玛咖多糖的测定方法,优化了玛咖多糖的提取,对玛咖多糖的体外抗氧化性进行了初步分析,并对玛咖多糖进行了进一步分离纯化及玛咖多糖的单糖组成及红外光谱特性进行了初步研究。本论文主要结论如下:1.确定了苯酚硫酸法测定玛咖多糖的测定条件,以葡萄糖为标准物,用精制玛咖多糖计算换算因子,换算因子为1.984,选择6%苯酚1.4mL、用6mL硫酸进行显色15min,可以得到较好的显色效果。同时,验证了苯酚硫酸法测定玛咖多糖的稳定性和重复性均较好,一般实验室都能满足测定要求。2.优化了水浴提取,超声辅助提取,微波辅助提取对玛咖多糖得率的影响,得出水浴提取玛咖多糖,以1:40的料液比条件下,50℃提取90min,提取一次,多糖得率可以达到61.5%。3.比较了sevage法,中性蛋白酶水解法,sevage+中性蛋白酶水解法三种不同方法对玛咖多糖脱蛋白效率的影响,同时测定对多糖损失率的影响。结果表明,连续使用sevage法6次可以达到约60%的蛋白脱除率,但是多糖的损失率达到30%左右。中性蛋白酶法处理一次,蛋白质去除率可达50%而且多糖的损失率只有10%,结合sevage法和中性蛋白酶法,处理一次就可去除蛋白质60%,达到sevage法处理6次的效果,但是多糖损失率明显降低,提高了处理效果。4.探讨了不同方法提取的玛咖多糖的体外抗氧化作用。实验采用热水提取,超声波,微波辅助提取,60%,80%乙醇分级醇沉五种提取方法提取南美药食两用植物玛咖的多糖成分,并与抗坏血酸相比较测定玛咖多糖的还原力,清除[DPPH]自由基活性,清除超氧阴离子自由基能力以及清除羟自由基活性能力。结果表明,80%分级醇沉提取的玛咖多糖有最强的体外抗氧化活性。60%乙醇沉淀的多糖体外抗氧化性最弱。5.采用阴离子柱层析和凝胶柱层析对玛咖粗多糖进行了进一步的细分,研究证明在PH为8,离子强度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液条件下,使用DEAE纤维素柱层析分得两种玛咖多糖组分,再使用凝胶柱层析,对两组分进行脱盐,均得到单一峰,分别命名为MACA1, MACA2。对MACA1多糖和MACA2多糖进行水解,再乙酰化,利用气相色谱柱以各种单糖为标样测定两多糖组分的单糖组成。结果证明,MACA1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和一未知物组成.MACA2主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和一未知物组成。6.玛咖多糖的红外光谱结果显示其具有多糖类物质的特征吸收峰,MACA1具有吡喃糖的特征吸收峰,表明其组成单糖为吡喃糖。对制备的玛咖多糖组分MACA2进行红外光谱分析,多糖MACA2为β-葡聚糖为主的玛咖多糖。
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