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大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次级代谢产物,雌马酚是其主要苷元成分黄豆苷元在人体肠道菌群作用下的代谢产物之一,比异黄酮具有更高生物学活性。目前人们已筛选出一些能将黄豆苷元直接转化为雌马酚的菌株,它们首先将底物黄豆苷元转化为二氢黄豆苷元,然后再将二氢黄豆苷元转化为雌马酚。但对于这些产雌马酚菌来说,只是比较系统的研究了它们的代谢途径,参加代谢相关的酶学证据、酶和基因方面的研究极少。课题组前期从健康成人肠道中获得一株可产雌马酚的肠道菌Slackia属菌株HY-2,该菌株能将黄豆苷元直接转化为雌马酚。本研究以菌株HY-2和代谢途径的中间产物二氢黄豆苷元为研究对象,对参与黄豆苷元到二氢黄豆苷元、二氢黄豆苷元到雌马酚转化的酶分别作了粗提取,并对提取条件作了优化,然后研究了这两种粗酶的性质。其中黄豆苷元还原酶(Daidzein reductase)能够催化黄豆苷元转化为二氢黄豆苷元,二氢黄豆苷元-雌马酚还原酶(Dihydrodaidzein-equolreductase)能够催化二氢黄豆苷元转化为雌马酚。主要结果如下:(1)研究了不同大豆食品对人体内异黄酮代谢的影响。12名雌马酚生产者在摄入不同苷元含量的大豆食品后,分别收集他们0~48h尿液并检测了尿液中异黄酮含量,结果显示尿液中雌马酚、黄豆苷元及染料木黄酮排泄量差异不显著,体内异黄酮的代谢不受大豆食品中异黄酮苷元含量的影响。(2)黄豆苷元还原酶是一种诱导型胞外酶,对菌株HY-2产黄豆苷元还原酶的培养条件进行了优化,其结果为:黄豆苷元添加量75μg/mL,培养基初始pH7.5,接种量6%,培养温度34℃,培养时间12h。经优化培养后,二氢黄豆苷元含量达到2.78μg/mL左右,比优化前提高20.9%。经硫酸铵沉淀、透析脱盐后,初步研究粗酶性质为:最适反应温度35℃,最适pH值6.5,在pH值6.0~7.5之间最为稳定,大多数金属离子对其影响较小。(3)二氢黄豆苷元-雌马酚还原酶是一种诱导型胞内酶,在提取二氢黄豆苷元-雌马酚还原酶过程中,对超声波破碎条件进行了优化。其结果为:菌体重量/缓冲液体积1/3(g/mL),工作2s,间隔8s,超声总时间15min。经优化后,雌马酚含量是2.77μg/mL。经硫酸铵沉淀、透析脱盐后,初步研究粗酶性质为:最适反应温度30℃,在pH值6.0~7.5之间最为稳定,最适pH值7.0,大多数金属离子对其影响较小。