灵芝作为传统中药材,能够益心气、安精魂、坚筋骨,具有很高的药用价值。现代研究表明,灵芝多糖具有抗肿瘤、增强免疫力等多种生物活性。液态发酵法生产灵芝多糖具有产量高、周期短等优点,逐步得到了国内外研究学者的广泛关注。但目前针对发酵法生产灵芝多糖的研究主要集中在发酵条件优化和菌株筛选方面,对发酵来源的多糖尤其是胞外多糖结构特征方面研究较少。本论文在筛选获得胞外多糖高产菌株的基础上,探究碳氮源对胞外多糖结构特征的影响,通过活性比较初步探索其构效关系,为灵芝发酵胞外多糖的开发利用奠定基础。本研究首先针对十株灵芝菌株进行液态发酵培养,对其菌丝体生物量、胞内多糖含量、胞外粗多糖得率及其多糖含量和单糖组成特征进行了系统分析。结果表明,G0023和G0160菌株胞外粗多糖得率均较高,分别为3.02和3.14g/L,其多糖含量分别达到了84.11%和91.03%,可作为发酵高产胞外多糖的优良菌株。分级醇沉胞外多糖分析结果表明,胞外液中以大分子量多糖为主,单糖组成分析结果显示其主要由葡萄糖组成,含有少量木糖和甘露糖。胞外液表观粘度大小与菌株对应大分子多糖组分的得率及多糖含量呈正相关。活性比较结果显示,各菌株发酵胞外多糖20E组分均具有增强免疫的活性,其中以G0023和G0160发酵所得的20E组分活性最高。以G0160菌株为研究对象,在不同碳源和氮源组合培养基中进行发酵培养,探究碳氮源对胞外多糖含量与结构特征的影响。结果显示,碳源、氮源的改变,在一定程度上会影响到醇沉后多糖组分的得率和单糖组成特征。但大分子多糖组分20E的得率和多糖含量均较高。单糖组成分析结果显示,当以酵母粉为氮源时,大分子胞外多糖组分的单糖组成以葡萄糖为主,比例基本处于50%~80%之间;当以蛋白胨和酵母膏为氮源时,胞外液中的20E多糖组分在单糖组成上以与添加碳源相同的单糖为主,其次为葡萄糖。活性比较结果显示,当以酵母粉为氮源时,发酵液中以20%乙醇沉淀所得的大分子量胞外多糖组分的活性普遍高于以酵母膏和蛋白胨为氮源培养时所得的对应组分。当碳源为葡萄糖和果糖时,活性要高于以其他单糖为碳源时的多糖组分。而以木糖和鼠李糖为碳源时所得对应组分均未检测出该活性。在G0160发酵培养结束后的胞外液中接入酵母菌进行培养,探究酵母菌生长对灵芝胞外多糖特征的影响。结果显示,随着酵母培养时间的延长,胞外液中大分子量多糖组分20E的得率逐渐降低,低分子量组分70E的比例逐渐上升。单糖组成也由以葡萄糖为主向以甘露糖为主转变。活性比较结果显示,经酵母发酵之后,不同多糖组分活性有所上升,其中发酵培养24h时各多糖组分活性最高。